韦德唯一官方-Klenow聚合酶

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韦德唯一官方-Klenow聚合酶

韦德唯一官方- Klenow 通過截短其N-末端從(cong) 全長韦德唯一官方 聚合酶修飾，分子量為(wei) 61kDa。

描述：
韦德唯一官方 -Klenow 通過截短其N-末端從(cong) 全長韦德唯一官方- Klenow 修飾，分子量為(wei) 61kDa。與(yu) 常規韦德唯一官方- Klenow 相比，這種截短形式缺乏5' - > 3'外切核酸酶活性，但更具熱穩定性，並且在PCR擴增中具有更高的保真度。

應用：
- PCR（普通和高通量）
- 引物延伸
- 微陣列分析
- 變性液相色譜（DHPLC）

來源：攜帶來自嗜熱生物Thermus Aquaticus YT-1 的韦德唯一官方- Klenow基因的
重組大腸杆菌菌株。

供應：
10x 韦德唯一官方 PCR Buffer（無dNTP）

提供：
20 mM Tris-HCl 
100 mM NaCl 
1.0 mM DTT 
0.1 mM EDTA 
穩定劑
50％甘油
pH 7.5 @ 25°C 

單位定義(yi) ：
1單位定義(yi) 為(wei) 酶量將在75℃下在30分鍾內(nei) 將10nmol的dNTP摻入酸不溶性材料中。

PCR指南：
韦德唯一官方 -Klenow是初和常用的PCR酶。韦德唯一官方酶擅長於(yu) 從(cong) 低複雜性模板來源擴增較短（<5kb）的序列，並且在很少或沒有優(you) 化反應條件的情況下產(chan) 生穩健的產(chan) 率。在使用韦德唯一官方 DSC 2.0 聚合酶設計PCR策略時，請考慮以下指南。

1. 模板：盡管通常不需要對PCR模板進行大量純化，但應注意粗製或部分純化的來源，因為(wei) 處理和化學試劑會(hui) 對PCR過程產(chan) 生不利影響。應避免接觸短波紫外線或其他損傷(shang) 劑，高離子強度，SDS，加載染料和苯酚等清潔劑也應避免接觸。為(wei) 了防止以前的PCR反應造成汙染，請考慮在正壓罩和氣溶膠屏障吸管設置反應。在典型的25個(ge) 循環PCR中，104個(ge) 拷貝的靶序列將產(chan) 生可重複的擴增產(chan) 物。這相當於(yu) 大約0.1-1ng / ml（終濃度）的質粒和1-10μg/ ml的基因組。使用較低的濃度通常會(hui) 產(chan) 生較少的非特異性產(chan) 物，

2.引物設計：理想地，寡核苷酸引物長度為(wei) 15-30個(ge) 堿基，接近50％G + C，並具有相等的（+/- 3℃）退火溫度。建議使用軟件來檢測自身互補或發夾易發區域，並由一些綜合提供商提供服務。注意，雖然引物的5'末端可能包含未模板序列，但3'末端必須*匹配。反應中典型的寡核苷酸濃度為(wei) 0.1-0.5μM。

3.鎂：鎂是PCR反應的關(guan) 鍵組成部分，盡管其濃度可以調節以促進各種效應。通常，1.5-2.0mM Mg ²⁺靶向，但更高的濃度（高達5mM）可用於(yu) 以保真度為(wei) 代價(jia) 刺激反應的產(chan) 率。相反的情況也是如此 - 較低的鎂濃度將促進更高保真度的產(chan) 品，總體(ti) 擴增產(chan) 率更低。注意，某些反應組分，特別是模板和寡核苷酸，可能為(wei) 反應提供螯合劑，這會(hui) 降低有效的鎂濃度並使反應餓死。

4. dNTP：通常，使用100-200μMdNTP的終濃度，盡管更高的濃度可以刺激產(chan) 量（特別是對於(yu) 更長的靶標）並且更低的可以提供保真度的增加。韦德唯一官方酶DSC 2.0 聚合酶還可以摻入和讀取脫氧尿苷和肌苷，這兩(liang) 種類似物在某些應用中使用。

5. 韦德唯一官方 DSC 2.0聚合酶：典型的是1單位/50μL反應（20U / mL），但可以添加額外的酶以刺激產(chan) 率。韦德唯一官方 DSC 2.0 聚合酶以大約1-2000個(ge) 核苷酸/分鍾擴展模板，因此建議每個(ge) 循環每個(ge) kb應提供30-60秒的延伸時間。適當的延伸溫度範圍為(wei) 68-72°C。因為(wei) 韦德唯一官方 DSC 2.0 聚合酶利用聚合酶對雙鏈段的天然親(qin) 和力來促進其熱啟動功能，所以它不需要廣泛的初始變性步驟來激活聚合酶。

典型的50μl反應：
在冰上，準備以下每種主混合物，合並，並置於(yu) 加熱（至94°C）熱循環儀(yi) 中：

2x /寡核苷酸主混合物：
1.0μl10mM 
dNTPs1.0μl10μMFrontPrimer 
1.0微升10μM反向引物
1.0微升500納克/微升基因組 
21微升I型水

2X酶/緩衝(chong) 液預混：
5.0微升10X 的韦德唯一官方 PCR緩衝(chong) 液（無的dNTP）
0.2微升5單位/微升的韦德唯一官方 DSC 2.0 聚合酶
19.8微升I型水

推薦儲(chu) 存條件： -20°C

部分產(chan) 品：

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