ALSTEM是一家位於(yu) 灣區的早期生物技術公司，擁有快速擴展的產(chan) 品和服務組合，為(wei) 生物製藥和學術機構提供服務。受到加利福尼亞(ya) 幹細胞研究承諾的啟發，ALSTEM於(yu) 2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術專(zhuan) 業(ye) 知識的科學家創立。
描述
ViralBoost Reagent（500X）是一種新型的小分子混合物，可以增強病毒的產(chan) 生，是一種功能強大，廣泛適用於(yu) 有效病毒包裝的試劑。ViralBoost試劑在轉錄水平上穩定地調節病毒RNA包裝，這可以增加逆轉錄病毒顆粒或慢病毒顆粒的產(chan) 量高達10倍。易於(yu) 使用的協議使ViralBoost Reagent非常適合各種規模的病毒包裝。
圖1.來自GFP逆轉錄病毒轉導的HEK 293T細胞的流式細胞術數據，其在不存在和存在ViralBoost試劑的情況下包裝。
圖2.用GFP慢病毒轉導的HEK 293T細胞，其與(yu) ViralBoost一起包裝和不包裝
產(chan) 品名稱 | ViralBoost |
目錄 ＃ | VB100 |
尺寸 | 1毫升 |
運輸 | 環境溫度 |
儲(chu) 存和穩定性 | 儲(chu) 存在4°C。根據指示儲(chu) 存，本產(chan) 品可穩定保存12個(ge) 月。 |
質量控製 | 每批ViralBoost試劑在使用人胚胎腎293T細胞的轉染試驗中進行功能測試。 |
用法 | 用逆轉錄病毒或慢病毒包裝質粒混合物轉染人胚腎（HEK）293T細胞後6-14小時，用補充有10％熱滅活的胎牛血清和0.5％青黴素 - 鏈黴素的新鮮DMEM培養(yang) 基替換培養(yang) 基，並添加將1/500體(ti) 積的ViralBoost試劑加入一體(ti) 積的新鮮培養(yang) 基中，並在37℃下在CO2培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。 |
限製使用 | 僅(jin) 供研究使用。不得用於(yu) 診斷或治療程序。 |
ViralBoost Reagent是一種新型的小分子混合物，用於(yu) 高滴度病毒的生產(chan) ，是一種功能強大，廣泛適用於(yu) 有效病毒包裝的試劑。它穩定地調節轉錄水平上的病毒RNA包裝，這可以大大增加逆轉錄病毒顆粒或慢病毒顆粒的產(chan) 量，多可達10倍。易於(yu) 使用的協議使ViralBoost Reagent非常適合各種規模的病毒包裝。
第1天：轉染前一天，
1.用1x明膠塗布板/盤30分鍾。吸出明膠，每100mm平板塗3-4~10×10 6 HEK 293T細胞。每塊板使用10毫升培養(yang) 基。
注意：良好的單細胞懸浮液（胰蛋白酶消化良好）和均勻分布細胞非常重要。
第2天：轉染
注意：按照製造商的協議準備轉染。
2.準備兩(liang) 個(ge) 試管，並在每個(ge) 試管中加入0.5 ml DMEM。在一個(ge) 試管中，加入混合物（含有病毒載體(ti) 和包裝混合物）並通過標記管充分混合。在另一個(ge) 試管中，添加NanoFect（目錄號NF100）。通過標記管混合。
注意：在室溫（20-25°C）下孵育不超過5分鍾。
3.將NanoFect-DMEM混合物轉移到管中，上下移液2-3次。通過渦旋混合5-10秒充分混合。
4.在室溫下孵育約15分鍾，以允許NanoFect / 複合物自組裝。
5.將NanoFect / 混合物逐滴添加到板上，輕輕搖動板並將板放回培養(yang) 箱中
第3天：更改培養(yang) 基並添加ViralBoost
6.用10ml新鮮培養(yang) 基替換上清液，並補充20μlViralBoost（500X）。將平板放回細胞培養(yang) 箱中。
第4天：收集病毒
！小心小心處理病毒材料並避免溢出。使用漂白劑淨化有害液體(ti) （10％終濃度30分鍾）。
7.將上清液收集在50ml錐形管中並置於(yu) 冰上。將上清液以1,000g離心10分鍾以除去細胞碎片。（將離心機預設為(wei) 4°C）
8.通過0.45μm過濾器過濾上清液。將過濾的上清液轉移至無菌容器中，並向每4體(ti) 積含病毒的上清液中加入1體(ti) 積的冷逆轉錄病毒/慢病毒沉澱溶液（4℃，目錄號VC100和VC200）。（例如：5ml逆轉錄病毒/慢病毒沉澱溶液，含20ml病毒上清液）。
9.充分混合並冷藏過夜。
第5天：濃縮病毒
10.在4℃下以1500g離心混合物30分鍾。離心後，病毒顆粒可能在容器底部顯示為(wei) 米色或白色顆粒。
11.丟(diu) 棄上清液。通過以1500g離心5分鍾來旋轉殘留溶液。通過抽吸去除所有的液體(ti) 痕跡，小心不要打擾顆粒中沉澱的病毒顆粒。
12.使用冷的無菌PBS或DMEM在4℃下以1/10至1/100的原始體(ti) 積重懸病毒顆粒。在低溫小瓶中等分並儲(chu) 存在-80°C直至準備使用。
注意：可以使用病毒濃縮/純化程序去除ViralBoost Reagent。當直接用於(yu) 轉導HEK 293T細胞時，尚未檢測到具有ViralBoost試劑的粗病毒顆粒對目的基因表達的副作用，但是從(cong) 細胞係到細胞係可能是不同的。建議事先測試ViralBoost對靶細胞的影響。
貨號 | 品名 | 規格 | 品牌 |
VB100 | ViralBoost | 1毫升 | alstembio |
VC100 | 慢病毒沉澱解決(jue) 方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
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