BMA的主要專(zhuan) 長在於(yu) 抗體(ti) 在免疫組織化學和酶免疫測定（ELISAs）中的應用。生產(chan) *適用於(yu) 沒有胎牛血清的培養(yang) 基。這不僅(jin) 是對可持續性和動物福利的重要貢獻，而且產(chan) 品不含有汙染的牛抗體(ti) 。它們(men) 通常僅(jin) 供體(ti) 外研究使用，但支持向診斷領域的公司許可適當的產(chan) 品。

BMA S-1007說明書(shu)

S-1007

描述

S100A8 ELISA（鈣粒蛋白A，MRP8）

應用

EIA和ELISA

價(jia) 錢

瑞士法郎940.00 / 2×96測試
 

數量

2 x 96次測試

MRP8（S100A8）
酶免疫分析
用於(yu) 生物液體(ti) 中mrp8的特異性測定
測試說明
產(chan) 品代碼：S-1007
批號：23E1203
僅(jin) 供體(ti) 外和研究使用。
不適用於(yu) 診斷應用。

試劑盒包含：2個(ge) 預塗、幹燥的微量滴定板和執行2x96測試的試劑。
到達後冷藏，不要冷凍。

簡介和基本信息
替代名稱：
MRP8:S100A8，鈣粒蛋白A，CP-10（小鼠體(ti) 內(nei) ）
MRP14:S100A9，鈣粒蛋白B
MRP8/14:鈣保護素，L1，（P8,14），p34
遷移抑製因子相關(guan) 蛋白（mrp）-8和-14屬於(yu) 鈣的s-100家族
與(yu) 骨髓細胞分化相關(guan) 的結合蛋白。它們(men) 在靜止期中性粒細胞、角質形成細胞（尤其是銀屑病）、浸潤性組織巨噬細胞和活動性炎症疾病的上皮細胞中高度表達。慢性或急性炎症中巨噬細胞亞(ya) 群的異質性反映在mrp8和mrp14的不同表達上。表達mrp8和mrp14的吞噬細胞屬於(yu) 早期浸潤細胞，而mrp8單獨存在於(yu) 慢性炎症組織中。mrp8、mrp14和ca2+依賴的mrp8/14雜合物的部分拮抗作用使它們(men) 成為(wei) 多種介質。
功能
MRP8/14雜合物的一個(ge) 主要功能是其抗菌活性（因此被稱為(wei) 鈣保護素）。mrp8/14通過競爭(zheng) 鋅抑製病原菌的生長。mrp8/14也可誘導某些腫瘤細胞凋亡。這些活性被zn2+和其他二價(jia) 陽離子所消除，而不是被ca2+或mg2所消除。+
mrp8/14雜合物的另一個(ge) 重要特性是其作為(wei) 脂肪酸轉運蛋白的*作用。ca2+依賴性脂肪酸-mrp8/14複合物是中性粒細胞中多不飽和脂肪酸的主要載體(ti) 。複合物在靜息細胞中表達，刺激後移向膜。Zn2+抑製生理性Zn2+血清濃度下MRP8／14的脂肪酸載體(ti) 容量，從(cong) 而在血液循環中不攜帶脂肪酸。
這使得mrp8/14成為(wei) 鈣信號傳(chuan) 導和花生四烯酸效應之間的重要介質。
mrp8（和mrp8/14，但不是單獨的mrp14）在炎症介質刺激下分泌。對中性粒細胞和單核細胞是一種有效的化學引誘劑。然而，mrp8不會(hui) 增加細胞內(nei) ca2+，也不會(hui) 引起氧化爆發和顆粒酶釋放，如c。
將MRP8暴露於(yu) 次氯酸鹽（可能由活化的中性粒細胞產(chan) 生）中，可將其轉化為(wei) 不活潑的二硫鍵二聚體(ti) 。糖皮質激素通過炎症介質上調mrp8的誘導。MRP8可能有助於(yu) 調節母胎之間的相互作用
解釋為(wei) 什麽(me) 滅活小鼠的mrp8基因是胚胎致死的。
mrp14和mrp8在活化巨噬細胞中的共同表達缺乏，說明它們(men) 的作用不同。mrp14的c端序列與(yu) 中性粒細胞固定因子的n端序列相同。mrp14可以磷酸化，從(cong) 而提高其鈣結合能力。然後它傾(qing) 向於(yu)
從(cong) 細胞溶膠轉移到細胞膜和細胞骨架。mrp14被證明與(yu) 具有轉移增強能力的中性粒細胞亞(ya) 群有關(guan) 。
生物化學
人mrp8分子量為(wei) 11.0kd，人mrp14分子量為(wei) 13.3kd，截短12.9kd。ca2+誘導形成（mrp8）（mrp14）（簡稱mrp8/14），（mrp8）2（mrp14）和（mrp8/14）2的雜合物。上麵各有兩(liang) 個(ge) EF手圖案
MRP8和MRP14。mrp14對鈣的親(qin) 和力高於(yu) mrp8，而cterminal-ef2的親(qin) 和力高於(yu) n末端ef1。c端結構域也主要決(jue) 定了二聚反應的特異性。ef2中的螺旋結構在鈣結合時發生了很大的構象變化，可能是鈣誘導構象的一個(ge) 觸發因素。
改變。

mrp8/14的抗菌活性是由鋅螯合作用引起的。
mrp14的c端被zn2+逆轉。兩(liang) 個(ge) 亞(ya) 單位都沒有顯示出抗菌作用
活性本身，表明鈣誘導的二聚反應導致多組氨酸序列的暴露改變。
ca2+誘導花生四烯酸和多不飽和脂肪酸與(yu) mrp8/14的結合是通過影響鈣依賴性脂肪酸結合囊的構象而被zn2+或cu2+阻止的。大脂肪酸結合發生在等摩爾濃度的mrp8和mrp14和
每個(ge) EF手的值大於(yu) 3個(ge) 鈣離子。
病理學意義(yi)
mrp8/14和mrp14通常與(yu) 急性炎症相關(guan) ，mrp8與(yu) 慢性炎症相關(guan) 。與(yu) 其他疾病標記物相比，mrps的診斷價(jia) 值和優(you) 勢在於(yu) 它們(men) 在相應細胞群激活後立即被製備和釋放。其他
標記物可能在下遊事件中產(chan) 生，或者需要在肝髒中從(cong) 頭合成。
不同條件下，mrp8/14雜合物水平與(yu) 疾病活動有顯著相關(guan) 性。然而，mrp8亞(ya) 單位水平的變化很少受到關(guan) 注。
-糞便mrp8/14水平預測炎症性腸病的複發，並區分健康對照組、無或低疾病活動性患者和活動性疾病患者。
-血漿mrp8/14水平可能是腎移植急性排斥反應的標誌物。
-血清mrp8/14濃度是酒精性肝硬化複發感染和低生存率的預後指標。
-血清，尤其是滑液中mrp8/14的濃度與(yu) 類風濕關(guan) 節炎的疾病活動密切相關(guan) 。sle患者血清mrp8/14水平高於(yu) 健康對照組，與(yu) 疾病活動、抗dna抗體(ti) 的存在以及關(guan) 節炎的發生有關(guan) 。
-mrp8和mrp14可在年齡相關(guan) 性腦改變和神經退行性疾病中檢測到。在腦瘧疾中，小膠質細胞的活化和mrp8/14的檢測在整個(ge) 大腦中廣泛存在。
-mrp8（原稱囊性纖維化（cf）抗原）是cf炎症的一個(ge) 指標，在cf患者的肺和血清中有組成性表達，在沒有急性不適或發熱的患者血漿中有升高。lps在cf中誘導mrp8的作用比正常人明顯。
-mrp8/14存在於(yu) 尿路結石和牙石中。齦溝液中mrp8/14水平與(yu) 其他牙周病標誌物有較好的相關(guan) 性，有助於(yu) 評價(jia) 牙周炎症的程度。

試驗原理
一步非競爭(zheng) 夾心法，過氧化物酶催化試劑限製
四甲基聯苯胺顯色反應，包括停止反應和在450/630nm處在多點讀板器中讀取。
提供的試劑
S-1007A：準備使用預塗和穩定的微量滴定板+板封閉劑（每個(ge) 2個(ge) ）。
s-1007b 500ng標準品，重組mrp8的穩定凍幹製劑。
S-1007D分析緩衝(chong) 液，3倍濃縮。紅色溶液。
S-1007E四甲基苯甲酰-H2O2溶液。保持在黑暗中。
S-1007F TMB底物緩衝(chong) 液（檸檬酸鉀）
S-1007R試劑混合物：2.1毫升含有HRPO偶聯檢測抗體(ti) 的混合物，
11倍濃縮
該試劑盒至少在冷藏保存的日期前是穩定的。
未提供的材料：停止溶液（1N硫酸，見下文）、稀釋用塑料管、清洗用等滲鹽水、移液管、重複移液管、8通道移液管（2）、微孔板清洗機和讀取器（450nm/630nm過濾器）。
開始分析前的準備工作讓所有試劑在開始前預熱到室溫。強烈建議對樣品和標準進行重複測試。準備除TMB以外的所有下列稀釋液
開始分析前的底物溶液

測定緩衝(chong) 液
用2份蒸餾水稀釋1份封閉濃縮液（S-1007D）以獲得分析緩衝(chong) 液。例：量取濃縮液15ml，加水30ml。
標準：
用1.0ml試液重建凍幹標準品。*渦流幾次，持續10秒，中間孵育幾分鍾。此500ng/ml標準品現在可以進一步稀釋。如有必要，將本標準中未使用的部分儲(chu) 存在-20℃以備進一步使用。
稀釋液：-在五個(ge) 1.5ml聚丙烯管上貼上“25”、“5”、“1”、“0.2”和“0.04”的標簽。
-在“25”管中加入950微升分析緩衝(chong) 液，在其他四個(ge) 管中加入400微升分析緩衝(chong) 液
-向“25”管中加入50微升500ng/ml儲(chu) 備溶液，進行連續稀釋。充分混合，將100微升該溶液轉移到“5”管中，並通過始終按降序將100微升轉移到下一個(ge) 管中繼續進行連續稀釋。這提供了五個(ge) 標準解決(jue) 方案，用於(yu) 生成具有重複標準的標準曲線。
試劑混合物（工作稀釋）
用10份分析緩衝(chong) 液稀釋1份封閉的試劑混合物（S-1007R）。示例：如果處理四個(ge) 含有32個(ge) 孔的試紙條（每個(ge) 孔將得到100微升），則將0.32ml試劑混合物添加到3.2ml分析緩衝(chong) 液中。根據你的需要調整這個(ge) 音量。
樣品：
在-20°C或更低溫度下將樣品分批儲(chu) 存。盡量避免樣品的凍融循環，並在適當稀釋的分析緩衝(chong) 液中稀釋樣品。血清或血漿應按1:5稀釋。
示例：在台式離心機中旋轉樣品5分鍾，然後將100微升添加到400微升分析中
Buffer。滑液用1:20-1:1000；呼氣、唾液、bal和尿液用1:2。
等滲鹽水：
在1升去離子水或類似質量的水中溶解9g NaCl。
TMB基質溶液：使用前立即製備。對於(yu) 整個(ge) 板，將20毫升基質緩衝(chong) 液（S-1007F）與(yu) 1毫升基質原液（S-1007E）混合。準備後15分鍾內(nei) 使用。

停止解決(jue) 方案
將硫酸稀釋至1N的濃度。示例：向100ml中添加2.9ml 95-97%的硫酸
水（按此順序）。95-97%濃硫酸（比重1.84）為(wei) 36N。
溶液宜在開始分析前製備。
試驗程序
1。向每個(ge) 孔中加入100μl稀釋試劑混合物（見上文）。重複吸管配藥
如果使用多個(ge) 色譜柱，100微升方便。
2a.向1號柱下井加入100μl的25ng/ml（“25”）至0.04ng/ml（“0.04”）標準溶液。
和2，如下所示。包括兩(liang) 個(ge) 空白（如果使用重複的樣本），得到
100μl分析緩衝(chong) 液。
2b.將100μL適當稀釋的樣品加入相應的孔中。
三。室溫下在潮濕環境中培養(yang) 90分鍾。
4。用等滲鹽水清洗盤子3次。用柔軟的吸水紙吸幹。
此時稀釋TMB基質溶液，準備好停止溶液和8通道移液管
及時停止顏色反應。
5。向每個(ge) 孔中加入200μL稀釋的TMB基質溶液。在室內(nei) 孵育3分鍾
溫度。當MRP8存在時，發生藍色反應。
6。通過向每口井中加入100μl停止溶液來停止顏色反應。顏色由藍色變為(wei)
黃色的。注意：停止溶液含有1N硫酸，具有腐蝕性，會(hui) 導致灼傷(shang) 。
如果與(yu) 眼睛接觸，立即用大量水衝(chong) 洗並就醫。
7。在大約15分鍾內(nei) ，讀取450nm處的吸光度，如有可能，參考設置為(wei) 630nm。
建議的板設置：
可選擇下列板布置，其中100至0.39為(wei) 標準稀釋液從(cong) 100ng/ml到0.39ng/ml，如上所述。SA-1至SA-40為(wei) 重複樣品。
CONT是指具有已知MRP8含量的對照血清（不包括在試劑盒中）。

計算
方法由複製品形成，樣品中的含量由標準曲線通過微型板計算軟件（如Softmax、分子裝置）或手動計算得出。超出標準範圍的樣品稀釋應使用適當的稀釋液重複。

局限性和不相容性
不應混合來自不同批次或不同分析的成分。
血清和血漿樣本可以給出可比的結果。然而，血液樣本需要在提取後立即冷卻，並立即分別處理成血漿或血清。
室溫和孵育時間或多或少影響所有反應。如果某些值偏離刻度（E450nm>3.0），我們(men) 建議從(cong) 每個(ge) 孔中取出相同體(ti) 積的溶液（例如100μL），並重新測量板。

結果的解釋
mrp8/14的循環水平是一個(ge) 很好的病理指標。此外，循環亞(ya) 單位mrp8和mrp14的水平也可以測量，並可能為(wei) 疾病的發病機製提供有趣的線索。mrp亞(ya) 家族正常範圍的測定
血清或血漿中：

MRP8／14複合物的濃度是炎症的嚴(yan) 重程度的指示（值＞100000 ng/ml）已在血清和血漿中測定。c-反應蛋白（crp）和其他炎症標誌物並不總是與(yu) mrp8/14相關(guan) ，因為(wei) mrp的水平比crp等急性期蛋白的水平升高更早。
mrp8/14低於(yu) 正常水平（<100ng/ml）可能提示粒細胞分化障礙。
MRP8濃度升高表示慢性炎症。研究表明，93%的類風濕關(guan) 節炎患者mrp8值升高。然而，mrp8水平在急性炎症如活化性關(guan) 節炎和細菌感染的正常範圍內(nei) 。
急性炎症，如細菌感染的特征是：
正常MRP8濃度
正常至升高的MRP14濃度
高濃度MRP8／14複合物（＞3000～100000 ng/ml血清）
慢性炎症，如類風濕性關(guan) 節炎的特征是：
高濃度MRP8
高mrp14濃度
略微升高的MRP8/14雜合物濃度。mrp8/14濃度在慢性炎症的急性期明顯升高。
病毒感染不會(hui) 導致mrp8/14濃度升高。胰腺炎患者的茜拉沒有顯示MRP8／14血清濃度升高。
糖皮質激素免疫抑製治療使mrp8/14雜合物水平恢複到正常範圍