genelink凝膠純化產(chan) 品簡介
如果應用是用於(yu) PCR 或測序,所有短於(yu) 40mer 的 Gene Link 寡核苷酸通常不需要任何進一步的純化。強烈建議將凝膠純化用於(yu) 涉及產(chan) 品克隆的所有應用,例如誘變、克隆或基因構建應用。不建議使用反相柱或 HPLC 純化。
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* 不建議對超過 35mer 的寡核苷酸進行反相柱純化。 |
純化 | ||
產品 | 目錄號 | 價格 $ |
聚丙烯酰胺凝膠純化;50 & 200 nmol 規模 | 26-6400-77 | 75.00 |
聚丙烯酰胺凝膠純化;1 m摩爾刻度 | 26-6400-55 | 150.00 |
聚丙烯酰胺凝膠純化;2 m摩爾刻度 | 26-6400-88 | 280.00 |
聚丙烯酰胺凝膠純化;10 m摩爾刻度 | 26-6400-44 | 1500.00 |
聚丙烯酰胺凝膠純化;15 m摩爾刻度 | 26-6400-99 | 1800.00 |
反相筒純化;50 & 200 nmol 規模 | 26-6400-11 | 30.00 |
反相筒純化;1 m摩爾刻度 | 26-6400-22 | 90.00 |
反相筒純化;2 m摩爾刻度 | 26-6400-23 | 170.00 |
反相筒純化;10 m摩爾刻度 | 26-6400-33 | 750.00 |
反相筒純化;15 m摩爾刻度 | 26-6400-34 | 900.00 |
寡核苷酸純化
的自動化化學合成得到了迅速改進,化學方麵取得了巨大的進步,使常規偶聯產(chan) 率超過 99%,並且每個(ge) 合成周期不到 3 分鍾的自動化非常可靠。在 20-30 聚體(ti) 範圍內(nei) 獲得的最終寡核苷酸產(chan) 物基本上是純的,具有非常低的截短序列,因此對於(yu) 大多數涉及聚合酶鏈式反應 (PCR*) 和 測序的常規應用不需要進一步純化。其他應用可能需要純化,建議用於(yu) 克隆、定點誘變、連接等。
寡核苷酸的純化可以通過多種方法完成,根據具體(ti) 要求進行選擇。可用和經常使用的常用技術是聚丙烯酰胺凝膠純化 (PAGE)、HPLC 和反相柱 (RPC)。下表總結了上述每種技術的純化範圍。
頁 | 高效液相色譜 | RPC | |
8-40mer | 是的 | 是的 | 是的 |
41-200mer | 是的 | 不 | 不 |
聚丙烯酰胺凝膠純化
這種方法的純化被認為(wei) 是寡核苷酸純化的黃金標準。PAGE 純化可用於(yu) 任何長度的寡核苷酸(與(yu) 僅(jin) 限於(yu) 寡核苷酸的 HPLC 和 RPC 柱相比,優(you) 選低於(yu) 35 聚體(ti) )。這種技術也是勞動強度高的方法。製備適當百分比的聚丙烯酰胺凝膠 (10-20%) 並對寡核苷酸進行電泳。主要產(chan) 物是最慢的遷移帶,通過紫外線陰影識別並切除。然後凝膠切片通常通過壓碎和浸泡法進行寡核苷酸洗脫處理。
高效液相色譜
HPLC 純化通常基於(yu) 利用疏水基質的反相。寡核苷酸是用三苯甲基 ON(合成寡核苷酸最後一個(ge) 堿基的 5' OH 處的三苯甲基)合成的,洗脫圖譜首先洗脫所有非三苯甲基化截短序列,然後洗脫疏水結合的全長寡核苷酸。該方法產(chan) 生大於(yu) 95% 的純度,具體(ti) 取決(jue) 於(yu) 寡核苷酸的序列和長度。基於(yu) 反相的 HPLC 在 35-40mer 寡核苷酸以上失敗,因為(wei) 較長的寡核苷酸本質上是疏水的並且非特異性結合。
反相墨盒
這是 HPLC 反相純化的廉價(jia) 替代品。用於(yu) 反相純化的小柱通常包含疏水性基質,例如 C18 二氧化矽,純化原理與(yu) HPLC 相同,根據寡核苷酸的序列和長度,純化可達到約 95% 的純度。基於(yu) 反相柱的純化在 35-40mer 寡核苷酸以上也失敗,因為(wei) 較長的寡核苷酸本質上是疏水的並且非特異性結合。
推薦
如果應用是用於(yu) PCR 或測序,所有短於(yu) 40mer 的 Gene Link 寡核苷酸通常不需要任何進一步的純化。強烈建議將凝膠純化用於(yu) 涉及產(chan) 品克隆的所有應用,例如誘變、克隆或基因構建應用。不建議使用反相柱或 HPLC 純化。
價(jia) 目單價(jia) 目表
純化 | |||||
50納摩爾 | 200 毫摩爾 | 1毫米摩爾 | 10米摩爾_ | 15米摩爾_ | |
凝膠純化 | 75.00 美元 | 75.00 美元 | $150.00 | $1500.00 | $1500.00 |
反相墨盒 (RPC) | $30.00 | $30.00 | $90.00 | $750.00 | $750.00 |
**聚合酶鏈式反應 (PCR) 過程受保護
霍夫曼-拉羅氏。使用授權試劑自動授予執行許可。
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