預塗層 96 孔微孔板

標準

標準稀釋緩衝(chong) 液

洗滌緩衝(chong) 液

檢測試劑A

檢測試劑B

稀釋劑 A

稀釋劑 B

TMB基板

停止解決(jue) 方案

封板機

37°C 培養(yang) 箱

多通道和單通道移液器和無菌移液器吸頭

噴瓶或自動微孔板清洗機

1.5 毫升試管

蒸餾水

吸水濾紙

100 毫升和 1 升量筒

酶標儀(yi) （波長：450 nm）

ELISA 搖床

血清：樣品應收集到血清分離管中。將試管垂直放置在 4°C 或室溫下長達 60 分鍾，使血清凝固。以大約 1000 × g 離心 20 分鍾。立即分析血清或分裝並儲(chu) 存在 -20°C 或 -80°C。

血漿：使用肝素或 EDTA 作為(wei) 抗凝劑收集血漿。在收集後 30 分鍾內(nei) 以 1000 × g 離心 15 分鍾。立即測定或分裝並儲(chu) 存在 -20°C 或 -80°C。避免溶血和高膽固醇樣本。

組織勻漿：組織勻漿的製備將根據組織類型而有所不同——這隻是一個(ge) 例子。用冰冷的 PBS 衝(chong) 洗組織以去除多餘(yu) 的血液。均質化前稱重。在 PBS 中用冰上的組織勻漿器將組織切碎並勻漿，並對細胞懸浮液進行超聲處理。將勻漿以 5000 × g 離心 5 分鍾並收集上清液。立即測定或分裝並儲(chu) 存在 -20°C。

1) 標準品：用推薦體(ti) 積的標準稀釋緩衝(chong) 液配製標準品，製成標準溶液。然後按照協議中的說明，使用標準稀釋緩衝(chong) 液對標準溶液進行係列稀釋。

2) 洗滌緩衝(chong) 液：按照方案中的說明，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩衝(chong) 液。

3) 檢測試劑製備：計算所需工作溶液的總體(ti) 積。分別用稀釋劑 A 和稀釋劑 B 以 1:100 稀釋檢測試劑 A 和檢測試劑 B。

1) 設置標準、測試樣品和對照孔。

2) 將 100 µl 稀釋標準品分裝到標準孔中。

3) 將 100 µl 標準稀釋緩衝(chong) 液分裝到對照（零）孔中。

4) 將 100 µl 稀釋樣品分裝到樣品孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時。

5) 將 100 µl 檢測試劑 A 分裝到每個(ge) 孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時。

6) 洗滌 3 次。

7) 將 100 µl 檢測試劑 B 分裝到每個(ge) 孔中。在 37°C 下孵育 90 分鍾。

8)洗滌5次。

9) 將 90 µl TMB Substrate 分裝到每個(ge) 孔中。在 37°C 下孵育 10-20 分鍾。

10) 分裝 50 µl 終止液。

11) 在 450 nm 處測量 OD。