Laminin-511 是基底膜的主要成分,可作為(wei) 多能幹細胞(ES/iPS 細胞)的支架。
作為(wei) 基底膜的一部分,層粘連蛋白 511 (800 kDa) 與(yu) 細胞表麵的整合素結合。
Laminin-511 是一種非常大的蛋白質 (800 kDa),由三條鏈(α-、β-和 γ- 鏈)組成,並形成超分子聚集體(ti) 。很難作為(wei) 重組蛋白生產(chan) 。
當我們(men) 將 Laminin-511 片段化並在細胞表麵尋找與(yu) 整合素結合的最小成分時,我們(men) 確定了稱為(wei) Laminin-511 E8 片段 (150 kDa) 的成分。我們(men) 決(jue) 定將該成分作為(wei) 重組蛋白生產(chan) 。
與(yu) “Laminin-511 (Intact)"相比,人類 iPS 細胞對 Laminin-511 E8 片段的粘附更強。
比較了層粘連蛋白 511 E8 片段和其他底物的細胞附著。
吸光度 (OD570) 表示相對於(yu) 對 Matrigel 的最大影響值進行歸一化的附著細胞的相對數量,該值被任意設置為(wei) 1。
該結果證實層粘連蛋白-511 E8 片段強烈地粘附於(yu) 細胞。
分散的人單個(ge) ES 細胞迅速粘附在 Laminin-511 E8 片段上並立即增殖。
我們(men) 在層粘連蛋白 511 E8 片段和其他細胞培養(yang) 基質上傳(chuan) 代人 ES 細胞。
傳(chuan) 代時單個(ge) 人 ES 細胞集落證實 Laminin-511 E8 片段迅速粘附在細胞上並增殖。
使用傳(chuan) 統的培養(yang) 方法,如果 ES/iPS 細胞分散成單個(ge) 細胞,細胞就會(hui) 死亡。
因此,在傳(chuan) 代時,一定程度上需要維持一個(ge) 細胞集落。
使用 Laminin-511 E8 片段作為(wei) 細胞培養(yang) 基質,甚至可以維持和培養(yang) 單個(ge) ES/iPS。
-> 減少學習(xi) 細胞培養(yang) 方法所需的時間。
-> 細胞培養(yang) 的延伸效率顯著提高。
*5天
*菌落傳(chuan) 代方法
傳(chuan) 統的培養(yang) 方法(菌落傳(chuan) 代)傳(chuan) 代時的延伸效率為(wei) 1:4,而使用Laminin-511 E8片段作為(wei) 細胞培養(yang) 基質時,延伸率為(wei) 1:100。
我們(men) 比較了傳(chuan) 統方法(菌落法)培養(yang) 30天的ES/iPS細胞數量和使用Laminin-511 E8片段作為(wei) 細胞培養(yang) 基質培養(yang) 的ES/iPS細胞數量。圖表的橫軸表示培養(yang) 天數,縱軸表示細胞數。
結果證實,與(yu) 傳(chuan) 統方法(菌落法)相比,使用Laminin-511 E8片段的細胞數增加了200或更多。
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