EZ-press Cell to c Kit
產(chan) 品概述
介紹
EZ-press 細胞到 c 試劑盒提供了一種快速簡便的方法，無需 RNA 分離即可從(cong) 培養(yang) 細胞中生產(chan) c。該試劑盒生成的c適用於(yu) 基因克隆和基因表達的定量分析，因此是TRIzol方法的良好替代品。
與(yu) TRIzol方法相比，該試劑盒具有以下幾個(ge) 顯著優(you) 勢：
1.易於(yu) 使用。從(cong) 培養(yang) 的細胞開始，隻需兩(liang) 個(ge) 步驟（細胞裂解和逆轉錄）即可合成高質量的c，無需RNA分離。
2.快速。整個(ge) 實驗（從(cong) 細胞到c）可以在不到35分鍾的時間內(nei) 完成。
3.穩定，可重複性強。在整個(ge) 實驗過程中，總RNA被完mei保留，從(cong) 而獲得穩定且高度可重複的結果。
4.靈敏度高。靈敏度高。每個(ge) 樣品的檢測下限僅(jin) 為(wei) 100個(ge) 細胞。
5. 沒有基因組殘留。基因組被充分去除。此外，該試劑盒中使用的試劑安全無毒，與(yu) 臭味和危險的TRIzol試劑相比，這是令人愉快的。
細胞裂解液解凍細胞裂解
緩衝(chong) 液，倒置或輕彈試管數次以徹di混合（不要使用渦旋），然後將試管放在冰上。
1A.對於(yu) 細胞數小於(yu) 3×105/樣品的貼壁細胞：
a） 從(cong) 孔中吸出培養(yang) 基。
b）用PBS（200μl/孔）洗滌孔。在不幹擾細胞的情況下盡可能完quan去除PBS。
c） 以 80 μl 細胞裂解緩衝(chong) 液/1×105個(ge) 細胞的比例向每個(ge) 樣品添加細胞裂解緩衝(chong) 液（例如您應該將160ul細胞裂解緩衝(chong) 液添加到2×105個(ge) 細胞中），輕輕上下移液5次以裂解細胞。
d）將細胞裂解物在室溫（19~27°C）下孵育5分鍾。
1B.對於(yu) 細胞數大於(yu) 3×105/樣品或懸浮細胞的貼壁細胞：
a）（僅(jin) 適用於(yu) 貼壁細胞，對於(yu) 懸浮細胞，從(cong) 步驟b開始）使用實驗室常規采用的傳(chuan) 代培養(yang) 方法分離細胞。
b）計數然後輕輕沉澱細胞，丟(diu) 棄生長培養(yang) 基，並將細胞放在冰上。
c） 通過將細胞重懸於(yu) 每 1×105個(ge) 細胞的 ~0.1 mL PBS 中來洗滌 PBS 中的細胞。
d）將一定量的細胞（~1×105）轉移到每個(ge) 樣品的新1.5ml Eppendorf管中，低速離心細胞，然後在不幹擾細胞沉澱的情況下小心吸出PBS。將細胞放在冰上。
e）向每個(ge) 樣品中加入80μl細胞裂解緩衝(chong) 液，輕輕上下移液5次以裂解細胞。
f）將細胞裂解物在室溫（19~27°C）下孵育5分鍾。
2.將裂解物放在冰上，在30分鍾內(nei) 進行RT反應。
注意：1.80μl細胞裂解緩衝(chong) 液的容量約為(wei) 1×105個(ge) 細胞，根據細胞類型而變化。為(wei) 了獲得最佳結果，強烈建議進行試點實驗以確定每次裂解的最佳細胞數。
2.在96、48、24和12孔細胞培養(yang) 板中培養(yang) 的細胞，細胞數不超過3×105，可在PBS洗滌後直接用於(yu) 裂解。當處理超過3×105 /孔（或培養(yang) 皿）的細胞時，請遵循程序1B：必須首先分離細胞（步驟a）。然後，將細胞培養(yang) 基加入胰蛋白酶分離的細胞中，計數，低速離心並棄去上清液（步驟b），用適當體(ti) 積的PBS重懸（步驟c），然後取~1×105個(ge) 細胞/樣品用80μl細胞裂解緩衝(chong) 液裂解（步驟d）。
3.細胞裂解物與(yu) 任何其他常用的RT試劑不相容（使用其他RT試劑無法產(chan) 生或很少的c）。因此，必須使用該試劑盒中提供的特殊優(you) 化的RT試劑對細胞裂解物進行逆轉錄。
反轉錄
按照產(chan) 品手冊(ce) 中的說明進行逆轉錄。
采用6對引物（HEK-293T細胞）實時qPCR對EZBiosescience®EZ-press細胞合成的c對c試劑盒和TRIzol -逆轉錄法合成的具有代表性的實驗結果
進行了評估。如下圖所示，EZ-press細胞轉c試劑盒與(yu) TRIzol -RT方法之間的結果高度一致，表明EZ-press細胞轉c試劑盒可以完quan替代TRIzol-RT方法從(cong) 細胞製備c。
產(chan) 品詳情
名稱 EZ-press Cell to c Kit
編號 B0001
品牌 ezbiosescience
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