ezbiosescience EZB-exo2說明書

Exosome Isolation Kit (from cell culture media for NTA/TEM) 

產(chan) 品概述

介紹

EZBiosescience®外泌體(ti) 分離試劑盒（來自NTA/TEM細胞培養(yang) 基）提供了一種簡單、可靠和快速的方法，用於(yu) 從(cong) 細胞培養(yang) 基、尿液、支氣管肺泡灌洗液（BALF）、腦脊液（CSF）樣品中分離高質量完整的總外泌體(ti) ，而無需超速離心。

外泌體(ti) 是含有RNA和蛋白質的小囊泡（30-120nm），由培養(yang) 物中的各種類型的細胞分泌，並在體(ti) 液（如血液，唾液，尿液和母乳）中大量存在。據報道，外泌體(ti) 作為(wei) 細胞間信使發揮作用，在特定細胞之間傳(chuan) 遞效應物或信號大分子;然而，它們(men) 的形成、貨物的組成以及它們(men) 所涉及的生物學途徑尚不清楚。

外泌體(ti) 分離試劑盒（來自細胞培養(yang) 基）提供了一種簡單可靠的方法，可以從(cong) 細胞培養(yang) 基樣品中濃縮完整的外泌體(ti) 。通過捆綁水分子，外泌體(ti) 沉澱試劑迫使溶解性較低的組分（即外泌體(ti) ）從(cong) 溶液中取出，從(cong) 而可以通過短暫且相對低速的離心收集它們(men) 。然後通過純化柱（0.22μm）純化重懸的外泌體(ti) 。

之後，外泌體(ti) 可用於(yu) RNA純化（用於(yu) RNA測序、RNA芯片、RT-qPCR）、蛋白質提取、粒度檢測和電子顯微鏡等。

協議

一般準則

a） 為(wei) 確保分離的外泌體(ti) 源自目標細胞，請用外泌體(ti) 耗盡胎牛血清（FBS）或無血清培養(yang) 基培養(yang) 細胞，因為(wei) 正常的FBS含有ji高水平的外泌體(ti) ，會(hui) 汙染細胞來源的外泌體(ti) 。如果您無法獲得外泌體(ti) 耗盡的FBS，某些細胞係可以在沒有FBS的培養(yang) 基中生長長達12小時。

b） 不建議使用外泌體(ti) 沉澱試劑 （EPR） 從(cong) 其他種類的樣品中分離外泌體(ti) 。如果要從(cong) 血漿中分離完整的外泌體(ti) ，請使用全外泌體(ti) 分離（從(cong) 血漿中分離）試劑。

準備樣品

1.收獲5~20ml細胞培養(yang) 基（或尿液，支氣管肺泡灌洗液，腦脊液）。

2.將血漿樣品在3000 × g 在4°C下離心10分鍾以除去細胞和碎片。

3.將含有無細胞培養(yang) 基的上清液轉移到新管中，而不會(hui) 幹擾沉澱。

分離外泌體(ti)

1.將所需體(ti) 積的無細胞培養(yang) 基轉移到新管中，並加入1/4體(ti) 積的外泌體(ti) 沉澱試劑（EPR）。

文化媒體(ti)	試劑
5毫升	1.25毫升
20毫升	5毫升

2.通過渦旋或倒置試管將培養(yang) 基/試劑混合物充分混合，直到溶液均勻。將樣品在 2 ~ 8°C 下孵育過夜。

3.孵育後，將樣品在4°C下以10000×g離心30分鍾。

4.通過移液小心地吸出上清液並丟(diu) 棄上清液。外泌體(ti) 包含在管底部的沉澱中（在大多數情況下不可見）。

重懸外泌體(ti)

1.向沉澱中加入1× PBS或類似的緩衝(chong) 液，上下渦旋或移液以重懸外泌體(ti) 。

啟動文化媒體(ti) 卷	重懸體(ti) 積
1毫升	30微升
10毫升	60微升

2.一旦沉澱重懸，外泌體(ti) 就可以進行下遊分析或通過親(qin) 和方法進一步純化。