直擴型韦德唯一官方 聚合酶說明書

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產(chan) 品詳情

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韦德唯一官方-D 聚合酶（Klen韦德唯一官方），是大腸杆菌重組表達的嗜熱細菌Thermus aquaticus來源的外切酶缺失型韦德唯一官方 聚合酶（刪除了5’ 外切酶結構域）。該酶具有5’→3’聚合酶活性，無5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴增產(chan) 物具有3'-dA尾巴。不可用於(yu) 韦德唯一官方man探針法q-PCR。本酶經基因工程改造，尤其適合於(yu) 溶解曲線法單核苷酸多態性（SNP）分型。擴增片段的長度可達3 kb。延伸速度為(wei) 1.0 kb/ min（72℃）。

特點

· 無外切酶活性，適合於(yu) 溶解曲線法單核苷酸多態性（SNP）分型；

· 熱穩定性好：95℃下半衰期超過40 min；

· 可以摻入dUTP、dITP、熒光標記核苷酸；

· 相比普通韦德唯一官方 聚合酶，本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的PCR。

濃度

2.5U/μl

活性定義(yi)

以大馬哈魚精子作為(wei) 模板/引物，在72℃、30 min內(nei) ，將10 nmol脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 活性單位（U）。

酶貯存緩衝(chong) 液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol。

產(chan) 品包裝規格及組成

運輸與(yu) 保存

-20℃保存 冰袋運輸

適用範圍

· 溶解曲線法基因分型/SNP測定；

· 菌落PCR；

· TA克隆PCR產(chan) 物添加3’-dA；

· 熒光標記；

· 血液、組織樣本等直擴PCR。

應用舉(ju) 例

以下反應舉(ju) 例為(wei) 50 μl標準PCR體(ti) 係， 僅(jin) 供參考。實際PCR條件應根據模板、引物、目的片段大小加以優(you) 化，確定最佳反應條件。

* template可參照如下標準（50 μl PCR體(ti) 係）：

PCR反應條件

注意事項

· 不可用於(yu) 韦德唯一官方man探針法q-PCR。

· 堿基出錯率是指在每個(ge) 堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數目。韦德唯一官方-D 聚合酶的堿基錯誤率為(wei) 1×10^-5。

· 建議在冰上配置PCR 反應液後，再放入PCR儀(yi) 中進行擴增。這有利於(yu) 提高擴增的特異性，減少非特異性擴增，得到良好的PCR結果。

· 如進行PCR擴增後，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當減少體(ti) 係中的酶用量，以增加PCR擴增反應的特異性。

· 本公司Buffer經大量PCR反應實例優(you) 化而成，然而對某些PCR反應存在一個(ge) 鎂離子濃度。若需要優(you) 化鎂離子濃度，請購買(mai) 本公司不含鎂離子的buffer和MgCl₂/MgSO₄。

· 本產(chan) 品僅(jin) 限科研實驗使用，臨(lin) 床應用安全性和有效性未鑒定，不可用於(yu) 醫療臨(lin) 床診斷。

質量控製

相關(guan) 測試表明無外源內(nei) 切酶或外切脫氧核糖核酸酶汙染。PCR方法檢測無宿主殘餘(yu) ，能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

室溫放置一周，擴增活性無明顯改變；但強烈建議不要在室溫下長期放置，用畢放回-20度。