美國GRC公司：Glen Research Corp 創建於1987年，專注於為和RNA寡核苷酸的化學合成，修飾，標記和純化提供zui廣泛的亞磷酰胺和固體支持物，現已有近三十年的曆史，在低聚核苷酸及修飾、改性領域一直處於地位。

Catalog Number: 10-1039-xx
Description: Amino-Modifier C6 dT

5'-Dimethoxytrityl-5-[N-(trifluoroacetylaminohexyl)-3-acrylimido]- 2'-deoxyUridine,3'-[(2-cyanoethyl)-(N,N-diisopropyl)]-phosphoramidite

Formula: C₅₀H₆₂N₆O₁₀F₃P 

M.W.: 995.05 

F.W.: 458.41 

目錄號：10-1039-xx 
描述：氨基修飾劑C6 dT

5'-二甲氧基三苯甲基-5- [N-（三氟乙酰基氨基己基）-3-丙烯酰亞(ya) 胺基] -2'-脫氧尿苷，3' - [（2-氰基乙基） - （N，N-二異丙基）] - 亞(ya) 磷酰胺

分子式：C _5 O H _6 2 N ₆ O _1 O F ₃ P. 

MW：995.05 

FW：458.41 

稀釋劑：無水乙腈

偶聯：氨基 - 修飾劑C6dT以與(yu) 正常亞(ya) 磷酰胺相同的方式反應。為(wei) 防止副反應，使用乙酰基保護的dC合成。有關(guan) 詳細信息，請參閱Deprotection。

去保護：合成器製造商推薦的標準方法無需更改。在標準氫氧化銨脫保護過程中除去TFA保護基團。氨脫保護期間的微小副反應可導致不可逆地封端2-5％的胺。如果進行多次添加修飾，則這可能很重要。為(wei) 了防止反應，使用乙酰基保護的dC合成並在65℃下在30％氨/ 40％甲胺1：1（AMA）中脫保護15分鍾。

儲(chu) 存：冷藏，高2-8°C，幹燥

溶液穩定性：2-3天

Diluent: Anhydrous Acetonitrile

Coupling: Amino-Modifier C6 dT reacts in a manner identical to normal phosphoramidites. To prevent side reactions, synthesize using acetyl-protected dC. See Deprotection for futher details.

Deprotection: No changes needed from standard method recommended by synthesizer manufacturer. The TFA protecting group is removed during standard ammonium hydroxide deprotection. A minor side reaction during ammonia deprotection can lead to irreversibly capping 2-5% of the amine. This could be significant if multiple additions of the modifier are made. To prevent the reaction, synthesize using acetyl-protected dC and deprotect in 30% ammonia/40% methylamine 1:1 (AMA) at 65°C for 15 minutes.

Storage: Refrigerated storage, maximum of 2-8°C, dry

Stability in Solution: 2-3 days

10-1039-90

100µm

10-1039-02

0.25g

10-1039-05

0.5g

常見問題技術問題

問題：氨基改性劑C6 dT和C2 dT的消光係數是多少？

響應： 260nm處的消光係數約為(wei) 10,000 / mol或10 /μmole。氨基修飾劑C6dT和C2dT的消光係數約為(wei) 8.7。這些單體(ti) 的合成不通過脫氧核苷，並且通過與(yu) dT-CE亞(ya) 磷酰胺相比較來估計該數字。

注：dA = 15.4，dC = 7.4，dG = 11.5，T = 8.7

下表顯示了包裝尺寸數據，以及基於(yu) 正常灌注程序的溶液，稀釋液和近似偶聯。

終點修飾符  MODIFIERS

Glen Research 5'-Modifiers設計用於(yu) 合成儀(yi) ，以功能化靶寡核苷酸的5'末端。5'-氨基 - 改性劑可提供各種鏈長，以*符合所需的應用。

與(yu) MMT保護的氨基相比，DMS（O）MT保護的氨基更容易脫保護。硫氧基衍生物在寡核苷酸合成的條件下存活，並且可以用標準解封閉溶液裂解，或保持完整用於(yu) HPLC純化。同時，DMS（O）MT組與(yu) 濾芯純化*兼容。當進行盒上的脫三苯甲基化時，DMS（O）MT ⁺，其比MMT ⁺更穩定，不會(hui) 重新連接到胺。我們(men) 現在使用這種新的基於(yu) 三苯甲基的保護基團提供5'-DMS（O）MT-氨基 - 修飾劑C6。 

5'-氨基 - 改性劑TEG，親(qin) 水性三甘醇乙胺衍生物，長度為(wei) 12個(ge) 原子，*可溶於(yu) 水性介質中。

縮寫

CE =氰乙基
CNEt =氰乙基
CPG =受控孔徑玻璃
DMT = 4,4'-二甲氧基 三苯甲基
Fmoc =芴基甲氧基羰基
iPr =異丙基
lcaa =長鏈烷基氨基
μm=微摩爾
MMT = 4-單甲氧基三苯甲基
nm =納摩爾
T =三苯甲基
TBDMS =叔丁基 - 二甲基甲矽烷基
TFA =三氟乙酰基

窗體(ti) 頂端

窗體(ti) 底端

終點修飾語（第2部分）

我們(men) zui新的5'-氨基改性劑，由新型鄰苯二甲酸二酰胺（PDA）保護基團保護，是穩定的固體(ti) 。與(yu) 作為(wei) 粘性油的TFA保護的氨基改性劑相反，類似的PDA保護的化合物是粒狀粉末。這些化合物的這一重要特性允許直接處理，儲(chu) 存和等分，並導致穩定性的顯著增加。 

用甲胺在氣相或水溶液或AMA中脫保護導致快速和*除去PDA保護基團。然而，氫氧化銨不會(hui) 使平衡反應完成並且僅(jin) 發生部分脫保護 - 用氫氧化銨過夜脫保護將產(chan) 生約80％活性胺。

我們(men) 提供三種PDA Amino-Modifiers：

• 5'-氨基 - 修飾劑C6-PDA
• 疏水性5'-氨基 - 修飾劑C12-PDA
• 親水性5'-氨基 - 修飾劑-TEG-PDA

知識產權

PDA氨基改性劑由Stefan Pitsch和ReseaChem GmbH（S.Berger）開發，正在申請。

其他儀器類型

所有次要堿基，RNA產(chan) 物和改性劑都包裝在適用於(yu) ABI和其他儀(yi) 器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類型的樣品瓶/色譜柱，請將以下內(nei) 容添加到目錄號的末尾。

終點修飾語（第3部分）

二硫化物硫醇改性劑可用於(yu) 引入3'-或5'-硫醇鍵。Dithiol Serinol，由硫辛酸和我們(men) 的絲(si) 氨醇骨架生產(chan) ，可以輕鬆連接多個(ge) 二硫醇標記的寡核苷酸到金表麵。5'-羧基 - 修飾劑C10是設計為(wei) 在寡核苷酸合成的末端添加的*接頭。它產(chan) 生活化的羧酸N-羥基琥珀酰亞(ya) 胺（NHS）酯，其適合於(yu) 在含有伯胺的分子的合成柱上立即綴合，產(chan) 生穩定的酰胺鍵。另一種羧酸鹽保護基團是2-氯三苯甲基基團，其使用標準去封閉循環簡單地除去，以在另外*保護的寡核苷酸上產(chan) 生遊離羧基。2-氯三苯甲基基團在用氫氧化銨或AMA進行低聚脫保護期間也被除去，並且與(yu) RP純化技術不相容。PC Amino-Modifier是一種光可裂解的C6氨基改性劑，是我們(men) 的光可裂解（PC）改性劑係列的一部分。5'-氨基氧基 - 修飾劑11基於(yu) 四乙二醇鍵，用於(yu) 改善溶解度和減少對寡核苷酸雜交的潛在負麵影響。由烷氧基胺與(yu) 醛反應形成的肟形成穩定的共價(jia) 鍵。相比之下，通過伯胺與(yu) 醛的共軛形成的亞(ya) 胺對酸性或堿性條件不穩定，並且需要隨後用硼氫化物還原以形成穩定的胺綴合物。5'-馬來酰亞(ya) 胺改性劑亞(ya) 磷酰胺，由巴塞羅那大學開發，含有馬來酰亞(ya) 胺環加成物，在室溫下對氫氧化銨穩定。該亞(ya) 磷酰胺可以與(yu) 磷酸酯和硫代磷酸酯鍵結合到和RNA中。retro-Diels-Alder反應在綴合之前立即使馬來酰亞(ya) 胺脫保護。

知識產權

5'-Carboxy-Modifier C10經TriLink BioTechnologies，Inc。許可銷售。它僅(jin) 用於(yu) 研究和開發目的，不得用於(yu) 商業(ye) ，臨(lin) 床，診斷或任何其他用途。它包含在美國No.6,320,041中。

5'-馬來酰亞(ya) 胺改性劑亞(ya) 磷酰胺受申請保護，由Glen Research根據巴塞羅那大學的許可協議提供。

Glen Research與(yu) AmberGen，Inc。和Link Technologies，Ltd。聯合提供PC Biotin，PC Amino-Modifier和PC Spacer產(chan) 品。Serinol產(chan) 品由美國號8,394,948涵蓋。

其他儀器類型

所有次要堿基，RNA產(chan) 物和改性劑都包裝在適用於(yu) ABI和其他儀(yi) 器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類型的樣品瓶/色譜柱，請將以下內(nei) 容添加到目錄號的末尾。

序列修飾符

序列修飾符設計用於(yu) 自動合成。羧基-dT在脫保護過程中水解，並且可以通過標準肽偶聯或通過中間體(ti) N-羥基琥珀酰亞(ya) 胺（NHS）酯直接與(yu) 含有伯氨基的分子偶聯。在寡核苷酸合成期間，可分別加入氨基 - 修飾劑dA，氨基 - 修飾劑dC，N2-氨基 - 修飾劑dG和兩(liang) 種氨基 - 修飾劑dT產(chan) 物代替dA，dC，dG和dT殘基。相應的氨基 - 修飾物支持物可以取代它們(men) 各自的脫氧核苷支持物。脫保護後，C6類似物上的伯胺通過具有總共7-10個(ge) 原子的間隔臂與(yu) 寡核苷酸分離，並且可以標記或附著於(yu) 酶。

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窗體(ti) 底端

序列修飾符（第2部分）

我們(men) 的NHS酯衍生物庫已經擴展到包括NHS-羧基-dT-CE亞(ya) 磷酰胺。通過製備羧基 - 修飾物C10的dT類似物，可以標記寡核苷酸內(nei) 的一個(ge) 或多個(ge) 位點。當亞(ya) 磷酰胺不可用時，這開辟了在寡核苷酸內(nei) 標記任何數量的不同染料或分子的可能性。這樣做很簡單，可以在合成器上手動完成，甚至可以在合成器上以全自動方式完成。

我們(men) 從(cong) 未發現允許TFA組從(cong) 氨基修飾劑中除去而寡核苷酸保持與(yu) 支持物連接的條件。我們(men) 能夠通過使用9-芴基甲氧基羰基（Fmoc）保護基來解決(jue) 這個(ge) 問題。使用兩(liang) 步法除去Fmoc基團，步除去氰乙基保護基團，用乙腈中的1％二異丙胺從(cong) 合成柱中衝(chong) 洗形成的丙烯腈，第二步用10％呱啶的DMF溶液除去Fmoc基團。在柱上形成的氨基可以與(yu) 各種活化酯反應。我們(men) 提供Fmoc-氨基修飾劑C6 dT亞(ya) 磷酰胺作為(wei) 核苷選擇，氨基修飾劑Serinol亞(ya) 磷酰胺作為(wei) 非核苷替代物。我們(men) 還提供S-Bz-Thiol-Modifier C6-dT，以加入用於(yu) 寡核苷酸合成的硫醇修飾劑等級。硫醇 - 改性劑C6-dT可以照常添加到序列內(nei) 的所需位置。

知識產權

Serinol產(chan) 品由美國號8,394,948涵蓋。

其他儀器類型

所有次要堿基，RNA產(chan) 物和改性劑都包裝在適用於(yu) ABI和其他儀(yi) 器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類型的樣品瓶/色譜柱，請將以下內(nei) 容添加到目錄號的末尾。

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3'-修飾符

含有用堿不穩定Fmoc基團保護的氨基的3'-氨基 - 修飾物CPG被設計成通過引入伯胺來官能化靶寡核苷酸的3'末端。在另一種方法中，注定成為(wei) 3'-氨基的氮包括在鄰苯二甲酰亞(ya) 胺（PT）基團中，該基團通過與(yu) 芳環連接的酰胺基團與(yu) 載體(ti) 連接。這種簡單的連接對於(yu) 寡核苷酸合成的所有條件都是非常穩定的，並且不含手性中心。使用延長的氫氧化銨處理（55℃，17小時），從(cong) 鄰苯二甲酰亞(ya) 胺中裂解胺，同時脫保護寡核苷酸。除非另有要求，否則提供ABI型柱。

知識產權

Serinol產(chan) 品由美國號8,394,948涵蓋。

3'-修飾語（第2部分）

3'-硫醇 - 修飾劑SS CPG載體(ti) 用於(yu) 將具有3和6個(ge) 原子間隔區的3'-硫醇鍵引入寡核苷酸中。3'-二硫醇絲(si) 氨醇CPG用於(yu) 在3'末端引入二硫醇基團。與(yu) Dithiol Serinol亞(ya) 磷酰胺一起，很容易在3'末端產(chan) 生具有多個(ge) 硫醇基團的寡核苷酸，這是與(yu) 金表麵結合的理想選擇。對於(yu) 甘油CPG，寡核苷酸的3'末端易被高碘酸鈉氧化形成3'-磷酸甘油醛。醛可以進一步氧化成相應的羧酸。醛或羧酸鹽可以用於(yu) 隨後與(yu) 含胺產(chan) 物的綴合。

知識產權

3'-硫醇 - 改性劑6 SS CPG由Berry＆Associates公司開發，並在Berry＆Associates的協議下銷售。

Serinol產(chan) 品由美國號8,394,948涵蓋。

其他儀器類型

所有次要堿基，RNA產(chan) 物和改性劑都包裝在適用於(yu) ABI和其他儀(yi) 器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類型的樣品瓶/色譜柱，請將以下內(nei) 容添加到目錄號的末尾。

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3'-修飾語（第3部分）

3'-氨基 - 修飾劑C6dC CPG和3'-氨基 - 修飾劑C6dT CPG分別在3'末端取代dC和T. 這些產(chan) 品可以方便地在3'標記，而不會(hui) 阻止末端產(chan) 生所需的酶活性。

化學磷酸化

化學磷酸化試劑常用於(yu) 磷酸化寡核苷酸的5'-末端。盡管該產(chan) 物在3'-磷酸化中也是成功的，但3'-磷酸CPG允許直接製備具有3'-磷酸基團的寡核苷酸。化學磷酸化試劑II在側(ce) 鏈上含有DMT基團，其對堿基切割是穩定的並且可以留在寡核苷酸上用於(yu) RP純化。隨後用酸水溶液除去DMT組，用氫氧化銨水溶液短暫處理後除去側(ce) 鏈，得到5'-磷酸鹽.1固體(ti) CPR II的性能與(yu) CPR II相似，但更容易製備等分試樣，因為(wei) 它是粉末。許多研究人員用受阻堿（例如二乙胺，二異丙基乙胺，或DBU）後合成以消除和除去氰乙基磷酸酯基團。以這種方式，原位形成的丙烯腈從(cong) 載體(ti) 上除去，並且不能使寡聚物中N3位的dT殘基烷基化。由於(yu) 3'-磷酸CPG中的磺基乙基也易於(yu) β-消除，導致寡核苷酸裂解，因此該技術與(yu) 3'-磷酸CPG不相容。使用基礎不穩定但不支持β-消除的CPR II CPG，可以在切割和堿基去保護之前從(cong) 寡核苷酸中除去氰乙基。除非另有要求，否則提供ABI型樣品瓶和色譜柱。原位形成的丙烯腈從(cong) 載體(ti) 上除去，不能使寡核苷酸中N3位的dT殘基烷基化。由於(yu) 3'-磷酸CPG中的磺基乙基也易於(yu) β-消除，導致寡核苷酸裂解，因此該技術與(yu) 3'-磷酸CPG不相容。使用基礎不穩定但不支持β-消除的CPR II CPG，可以在切割和堿基去保護之前從(cong) 寡核苷酸中除去氰乙基。除非另有要求，否則提供ABI型樣品瓶和色譜柱。原位形成的丙烯腈從(cong) 載體(ti) 上除去，不能使寡核苷酸中N3位的dT殘基烷基化。由於(yu) 3'-磷酸CPG中的磺基乙基也易於(yu) β-消除，導致寡核苷酸裂解，因此該技術與(yu) 3'-磷酸CPG不相容。使用基礎不穩定但不支持β-消除的CPR II CPG，可以在切割和堿基去保護之前從(cong) 寡核苷酸中除去氰乙基。除非另有要求，否則提供ABI型樣品瓶和色譜柱。在裂解和堿去保護之前，可以從(cong) 寡聚物中除去氰乙基。除非另有要求，否則提供ABI型樣品瓶和色譜柱。在裂解和堿去保護之前，可以從(cong) 寡聚物中除去氰乙基。除非另有要求，否則提供ABI型樣品瓶和色譜柱。

知識產權

固體(ti) 化學磷酸化試劑II和相關(guan) 載體(ti) 包括在歐洲EP0816368中。

參考（S）

1. A. Guzaev，A.Azhayev和H. Lonnberg，Tetrahedron，1995,51,9375-9384。

窗體(ti) 頂端

窗體(ti) 底端

醛改性

醛改性劑在寡核苷酸中是有吸引力的親(qin) 電子取代，因為(wei) 它們(men) 能夠與(yu) 氨基反應形成席夫堿，肼基形成腙，並與(yu) 氨基脲形成半哢唑酮。席夫堿是不穩定的，必須用硼氫化鈉還原以形成穩定的連接，但腙和氨基脲是非常穩定的鍵。

我們(men) 與(yu) 以前的Epoch Biosesciences的ELITechGroup合作，使我們(men) 能夠提供5'-醛改性劑C2亞(ya) 磷酰胺。縮醛保護基團具有足夠的疏水性，可用於(yu) RP HPLC和柱純化，並且在標準寡核苷酸脫三苯甲基化條件下用80％乙酸/ 20％水或2％三氟yi酸水溶液在寡核苷酸合成過程中容易除去。

甲酰基吲哚核苷類似物已用於(yu) 在寡核苷酸內(nei) 或5'末端引入醛基。該產(chan) 物在醛上沒有保護基團，這意味著可以在不改變優(you) 選條件的情況下進行修飾寡核苷酸的去保護。

知識產權

本產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 研究目的，不得用於(yu) 商業(ye) ，臨(lin) 床，診斷或任何其他用途。本產(chan) 品受ELITechGroup的所有權所有，並由ELITechGroup許可製造和銷售。對於(yu) 這些產(chan) 品，沒有商業(ye) 用途的隱含許可，並且必須直接從(cong) ELITechGroup獲得有關(guan) 這些產(chan) 品的任何擬議商業(ye) 用途的許可。“商業(ye) 用途”包括但不限於(yu) 產(chan) 品的銷售，租賃，許可或其他轉讓或從(cong) 中衍生或生產(chan) 的任何材料，銷售，租賃，許可或其他授權使用產(chan) 品或任何衍生材料或由其生產(chan) ，或使用本產(chan) 品為(wei) 第三方收取服務（包括合同研究）。

在終用戶和定製寡核苷酸服務可以購買(mai) 這些產(chan) 品以供上述定義(yi) 使用之前，必須簽署一份簡單的協議。

間隔修飾符

間隔子亞(ya) 磷酰胺C3,9，C12和18用於(yu) 在寡核苷酸中插入間隔臂。當需要較長的間隔物時，可以多次添加化合物。3'-間隔區C3 CPG還可以在3'末端充當外切核酸酶和聚合酶活性的阻斷劑。dSpacer用於(yu) 在寡核苷酸內(nei) 引入穩定的無堿基位點。PC Spacer是一種可光裂解的C3間隔物改性劑，是我們(men) 的光可裂解（PC）改性劑係列的一部分。

知識產權

Glen Research與AmberGen，Inc。和Link Technologies，Ltd。聯合提供PC Biotin，PC Amino-Modifier和PC Spacer產品。

所有次要堿基，RNA產(chan) 物和改性劑都包裝在適用於(yu) ABI和其他儀(yi) 器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類型的樣品瓶/色譜柱，請將以下內(nei) 容添加到目錄號的末尾。

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樹狀大分子

樹枝狀聚合物是離散的，高度支化的，單分散的聚合物，其具有令人聯想到樹木分枝的圖案。可以使用新型雙倍和三倍體(ti) 亞(ya) 磷酰胺合成子合成平原和混合寡核苷酸樹枝狀大分子。^1,2 樹枝狀大分子具有以下優(you) 點。使用g- ³²摻入標記P-ATP和多核苷酸激酶與(yu) 5'-末端的數量成比例地增加。如果在標簽和分支的末端之間加入間隔物，則熒光信號也與(yu) 5'末端的數量成比例地增加。當使用樹枝狀聚合物寡核苷酸作為(wei) PCR引物時，帶有樹枝狀聚合物的鏈對T7基因6外切核酸酶的降解具有抗性，使得易於(yu) 將PCR的雙鏈產(chan) 物轉化為(wei) 多重標記的單鏈探針。樹枝狀聚合物的穩定性增強使它們(men) 可用作納米組裝“自下而上”方法的構建模塊。當需要更高的溫度時，這些特征還表明在芯片技術中的應用，例如，熔化靶中的二級結構。

知識產權

這些產(chan) 品由牛津大學創新有限公司許可提供。

參考（S）

1. MS Shchepinov，IA Udalova，AJ Bridgman和EM Southern，Nucleic Acids Res，1997,25,4447-4454。
2. MS Shchepinov，KU Mir，JK Elder，MD Frank-Kamenetskii和EM Southern，Nucleic Acids Res，1999,27,3035-41。

其他儀器類型

所有次要堿基，RNA產(chan) 物和改性劑都包裝在適用於(yu) ABI和其他儀(yi) 器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類型的樣品瓶/色譜柱，請將以下內(nei) 容添加到目錄號的末尾。

支鏈亞磷酰胺

需要支化單體(ti) 來構建梳狀寡核苷酸探針。來自Chiron公司的梳子係統的評估了^1個(ge) 分支點的保護基團並選擇了乙酰丙酰基（LEV），其使用含有水合肼，乙酸和吡啶的試劑特異性地除去。

參考（S）

1. T. Horn，CA Chang和MS Urdea，Nucleic Acids Res，1997,25,4842-4849。

光可裂解改性劑

PC生物素亞(ya) 磷酰胺可用於(yu) 製備5'-生物素化的寡核苷酸，其適合於(yu) 通過鏈黴抗生物素蛋白以類似於(yu) 我們(men) 流行的5'生物素亞(ya) 磷酰胺的方式捕獲。已證明氨基和硫醇修飾的寡核苷酸非常適用於(yu) 各種半抗原和熒光團的連接，以及寡核苷酸與(yu) 多種珠子和表麵的連接。PC氨基 - 修飾劑亞(ya) 磷酰胺用於(yu) 製備適於(yu) 隨後光切割的5'-氨基修飾的寡核苷酸。PC Spacer亞(ya) 磷酰胺可用作中間體(ti) ，將任何可用作亞(ya) 磷酰胺的修飾試劑連接到寡核苷酸的末端。光切割後，上產(chan) 生5'-磷酸，使其適合進一步的生物轉化，

密蘇裏州華盛頓大學的研究人員描述了一種多功能光可裂解構建模塊，並用於(yu) 光觸發雜交。¹ 該試劑還用於(yu) 設計多功能和RNA結合物^2，用於(yu) 體(ti) 外選擇催化生物分子反應的新分子。德國Bruker Daltonik的研究人員還開發了genoSNIP，這是一種通過MALDI-TOF質譜進行單核苷酸多態性（SNP）基因分型的方法。³該方法通過摻入光可切割接頭使用引物延伸產(chan) 物的尺寸減小，用於(yu) 在延伸引物的3'末端附近的光觸發鏈斷裂。PC Linker可通過標準自動合成方法在任何位置摻入寡核苷酸中。PC連接子亞(ya) 磷酰胺具有額外的優(you) 點，即光切割在寡核苷酸片段的3'和5'末端都產(chan) 生單磷酸酯片段。

知識產權

Glen Research與(yu) AmberGen，Inc。和Link Technologies，Ltd。聯合提供PC Biotin，PC Amino-Modifier和PC Spacer產(chan) 品。

參考（S）

1. P. Ordoukhanian和JS。泰勒，J。Am。化學。Soc。，117,9570-9571,1995。
2. （a）F。Hausch和A.Jäschke，Nucleic Acids Research，2000,28，e35。
3. （b）F。Hausch和A.Jäschke，Tetrahedron，2001,57,1261-1268。
4. T. Wenzel，T.Elssner，K.Fahr，J.Bimmler，S.Richter，I.Thomas，和M.Kostrzewa，Nucleosides，Nucleotides＆Nucleic Acids，2003,22,1579-1581。

其他儀器類型

所有次要堿基，RNA產(chan) 物和改性劑都包裝在適用於(yu) ABI和其他儀(yi) 器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類型的樣品瓶/色譜柱，請將以下內(nei) 容添加到目錄號的末尾。

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使用CLICK CHEMISTRY進行共軛

銅（I）的疊氮化物和炔烴，以形成1,2,3-三唑之間催化的疊氮化物-炔環加成加成（CuAAC）反應，據報道¹由夏普勒斯，被發現是如此精致的區域選擇性和率在即使是溫和的條件Sharpless創造了“點擊化學”一詞來形容它。由於(yu) 銅離子損害，通常產(chan) 生鏈斷裂，因此這種方法用於(yu) 修飾的用途有所延遲。²現在通過使用銅（I） - 穩定配體(ti) （例如，三（苄基三唑基甲基）胺，TBTA ³）克服了這些問題，Carell等人。和Seela等人。發現CuAAC反應可用於(yu) 以*的效率使炔烴修飾的核堿基官能化。⁴ 

帶有單個(ge) 核苷炔基的寡核苷酸可以使用C8-炔烴-dC或dT-CE亞(ya) 磷酰胺製備。純化的寡核苷酸通常用2-5當量的相應標記物 - 疊氮化物（例如熒光染料疊氮化物）修飾。在加入預絡合的Cu（I）後，在30分鍾至4小時的時間跨度內(nei) 觀察到*轉化為(wei) 標記的寡聚物。在簡單的沉澱步驟後，可以接近定量的產(chan) 率回收標記的寡核苷酸。使用C8-炔烴，C8-TIPS-炔烴和C8-TMS-炔烴的組合，可以在多三次單獨的點擊反應中標記寡核苷酸。後兩(liang) 種單體(ti) 上的炔基分別用三異丙基甲矽烷基（TIPS）和san甲基甲矽烷基（TMS）保護基團保護。^5,6 在C8-炔烴上的固相上的次點擊反應產(chan) 生單一修飾的寡核苷酸，其*保留TIPS和/或TMS保護基團。對於(yu) 雙擊，使用C8-TIPS-炔烴作為(wei) 第二核苷，並且用氟化四丁基銨（TBAF）裂解TIPS保護基團而不對造成任何損害。溶液中的第二次點擊反應以*的產(chan) 率產(chan) 生雙重修飾的寡核苷酸。為(wei) 了引入三種不同的標記，將所有三種核苷引入寡核苷酸中。次點擊反應直接在樹脂上進行。隨後將單獨修飾的寡核苷酸從(cong) 載體(ti) 上切下，同時切割TMS基團並保留TIPS保護基團。第二次點擊反應在溶液中進行。

知識產權

baseclick的所有產(chan) 品均受保護，可與(yu) baseclick合作。

Baseclick GmbH已提交以下申請：

1.WO2006 / 117161，用於(yu) 敏感檢測分析物的新標記策略。

2.WO2008 / 952775，Click Chemistry用於(yu) 產(chan) 生報告分子。

Baseclick GmbH擁有“The Scripps Research Institute”的“Click Chemistry”研究市場的許可證：

3. WO03 / 101972，疊氮化物和乙炔的銅催化連接。

其他儀器類型

所有次要堿基，RNA產(chan) 物和改性劑都包裝在適用於(yu) ABI和其他儀(yi) 器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類型的樣品瓶/色譜柱，請將以下內(nei) 容添加到目錄號的末尾。

使用CLICK CHEMISTRY進行共軛（第2部分）

5-乙炔基-dU提供與(yu) 疊氮化物的方便的點擊綴合，以產(chan) 生與(yu) 寡核苷酸堿基之一剛性連接的標記。5-乙炔基-dU在裂解和去保護過程中經曆堿催化水合，特別是當使用強堿或加熱時。乙炔基的水合形成甲基酮，其隨後阻止潛在的點擊反應。當使用5-乙炔基-dU-CE亞(ya) 磷酰胺以防止該副反應時，需要溫和的脫保護條件。TIPS-5-Ethynyl-dU-CE亞(ya) 磷酰胺含有受保護的炔烴，與(yu) 寡核苷酸合成和脫保護具有更廣泛的相容性。用三異丙基甲矽烷基（TIPS）保護基保護5-乙炔基可防止寡核苷酸合成和後處理過程中酸或堿催化的水合作用。

知識產權

除其他申請（4-5）外，baseclick GmbH還獲得了以下（1-3）。

1.WO 2006/117161（用於(yu) 敏感檢測分析物的新標記策略）

2.WO 2008/952775（點擊化學用於(yu) 產(chan) 生報告分子）

3.WO 2010/115957（非均相催化劑上的化學）

4. PCT / EP2013 / 064610（Anandamide修飾的核酸分子）

5. PCT / EP 2015/056007（折紙的自組裝：診斷工具）

baseclick GmbH擁有du家授權申請

WO 03/101972（用於(yu) 核酸領域的銅催化的疊氮化物和乙炔的連接）在診斷和研究領域。由於(yu) Glen Research和baseclick是合作夥(huo) 伴，Glen Research現在能夠幫助對這項傑出技術進行再許可。

參考（S）

1. CW Tornoe，C。Christensen，M。Meldal，J。Org。化學。2002,67,3057-3064; VV Rostovtsev，LG Green，VV Fokin，KB Sharpless，Angew。化學。2002,114,2708-2711; Angew。化學。詮釋。埃德。2002,41,2596-2599。
2. CJ Burrows，JG Muller，Chem。Rev.1998,98,1109-1151。
3. TR Chan，R。Hilgraf，KB Sharpless，VV Fokin，Org。快報。2004年，6,2853 - 2855。
4. J. Gierlich，GA Burley，PME Gramlich，DM Hammond，T。Carell，Org。快報。2006,8,3639-3642。F. Seela，VR Sirivolu，Chem。生物多樣性2006,3,509-514。
5. PME Gramlich，S。Warncke，J。Gierlich，T。Carell，Angew。化學。2008,120,3491-3493; Angew。化學。詮釋。埃德。2008,47,3442-3444。
6. PME Gramlich，CT Wirges，A。Manetto，T。Carell，Angew。化學。詮釋。埃德。2008,47,8350-8358。

使用CLICK CHEMISTRY進行共軛（第3部分）

使用5'-己烯基亞(ya) 磷酰胺製備的寡核苷酸對標準脫保護條件是穩定的，並且在RP HPLC上顯示略微增加的保留時間。疊氮化物與(yu) 使用亞(ya) 磷酰胺的寡核苷酸合成不相容，因此需要後合成反應。疊氮基丁酸酯NHS酯使用¹在任一3'-末端或低聚的5'-末端胺的疊氮基修飾和它甚至可以用於(yu) 在序列內(nei) 的氨基-修飾-C6 DX殘餘(yu) 內(nei) 部修飾。具體(ti) 到5'-末端，在後一個(ge) 循環中加入5'-溴己基亞(ya) 磷酰胺。然後通過使用疊氮化na置換溴化物，可以容易地將該改性劑轉化為(wei) 5'-疊氮基。²炔烴NHS酯允許多種分子中的氨基部分的官能化，包括和RNA寡核苷酸以及肽或蛋白質。我們(men) 還提供兩(liang) 種用於(yu) Click化學的產(chan) 品，基於(yu) 我們(men) 的1,3-二醇產(chan) 品組合，其中含有絲(si) 氨醇骨架 - 用於(yu) 在5'末端或序列內(nei) 添加炔基的亞(ya) 磷酰胺，以及用於(yu) 標記3的化合物支持。 '具有炔基的寡核苷酸的末端。 

知識產權

Serinol產(chan) 品由美國號8,394,948涵蓋。

參考（S）

1. R. Kumar等，Journal of the American Chemical Society，2007,129,6859-6864。
2. J. Lietard，A。Meyer，JJ Vasseur和F. Morvan，Tetrahedron Letters，2007,48,8795-8798。

窗體(ti) 頂端

窗體(ti) 底端

使用CLICK CHEMISTRY進行共軛（第4部分）

1-乙炔基-dSpacer CE亞(ya) 磷酰胺可用於(yu) 寡核苷酸內(nei) 的任何位置，同時仍保持的點擊化學。使用標準亞(ya) 磷酰胺化學將改性劑有效地摻入寡核苷酸中，對常見的脫保護條件是穩定的，並且與(yu) Glen-Pak TM純化相容。1-炔基-dSpacer在與(yu) 疊氮化物點擊化學結合後產(chan) 生取代的1,2,3-三唑假核堿基1-乙炔基-dSpacer修飾物表現出與(yu) 標準dSpacer（10-1914）相似的雙鏈體(ti) 穩定性並且當雙鏈體(ti) 不穩定時內(nei) 部合並。在環加成後，通過所得的修飾結構來調節雙鏈體(ti) 穩定性。簡單的1,2,3-三唑是不穩定的，結合TEG接頭（6-FAM-TEG和Amino-TEG）的修飾也是如此。摻入芳族官能團的修飾使香豆素和補骨脂素在不同程度上恢複雙鏈穩定性，顯著恢複穩定性。

5'-碘修飾的寡核苷酸（使用5'-Iodo-dT製備）可以定量轉化為(wei) 相應的5'-疊氮化物

穩定性說明

除了在室溫下在氫氧化銨中進行脫保護24小時之外，常規製備含有5'-碘基的寡核苷酸。在這些條件下，碘基的降解小於(yu) 2％。

其他儀器類型

所有次要堿基，RNA產(chan) 物和改性劑都包裝在適用於(yu) ABI和其他儀(yi) 器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類型的樣品瓶/色譜柱，請將以下內(nei) 容添加到目錄號的末尾。

窗體(ti) 頂端

窗體(ti) 底端

OLIGO-CLICK KITS

Oligo-Click Kits在預裝和即用型小瓶中含有顆粒形式的空氣穩定的不溶性Cu（I）源。在試劑盒中，TBTA配體(ti) 被活化劑取代，活化劑與(yu) 水溶劑和有機溶劑相容。催化劑和配體(ti) /活化劑的這種創新組合使得標簽工作流程更加簡單，隻需三個(ge) 簡單的步驟。通過CuAAC標記寡核苷酸的製備現在僅(jin) 需要幾分鍾或甚至更少的小手動操作時間，並且可以在空氣中進行而無需任何額外的預防措施。Glen Research與(yu) baseclick GmbH合作提供以下套件。 

• Oligo-Kit M Reload：該試劑盒具有足夠的試劑，可在100 nmole級別上偶聯多達9種含有炔烴的寡核苷酸，或在1μmole級別上偶聯單個寡核苷酸。使用者必須提供疊氮化物和溶劑如DMSO以溶解疊氮化物。

• Oligo-Kit M Biotin，Oligo-Kit M熒光素和Oligo-Kit M TAMRA：每個試劑盒都有足夠的試劑，可以在100 nmole級別上偶聯7種含炔烴的寡核苷酸或1μmole級別的單一寡核苷酸。每個試劑盒都含有所有必需的成分，包括疊氮化物和DMSO溶劑。

窗體(ti) 頂端

窗體(ti) 底端

無銅點擊化學

在Glen Research，我們(men) 的目標是提供具有以下特性的無銅點擊亞(ya) 磷酰胺試劑：

• 簡單易用
• 在合成器上穩定解決方案
• 對氫氧化銨和AMA穩定
• 在室溫下17小時或更短時間內具有出色的哢嗒性能

從(cong) 迄今描述的各種基於(yu) 環辛炔的無銅點擊試劑，我們(men) 選擇提供基於(yu) 二苯並環辛炔（DBCO）結構的化合物。我們(men) 提供5'-DBCO-TEG亞(ya) 磷酰胺用於(yu) 製備具有5'-DBCO修飾的寡核苷酸和DBCO-dT-CE亞(ya) 磷酰胺用於(yu) 在寡核苷酸內(nei) 的任何位置插入DBCO基團。此外，我們(men) 還提供DBCO亞(ya) 磷酰胺 - DBCO-絲(si) 氨醇亞(ya) 磷酰胺。使用我們(men) 專(zhuan) 有的serinol骨架作為(wei) 非核苷間隔物，可以將DBCO組放置在序列中的任何位置，並且可以清楚地進行多次添加。DBCO-磺基-NHS酯也用於(yu) 合成後的綴合反應。DBCO-修飾的寡核苷酸可以在有機溶劑（例如DMSO）或水性緩衝(chong) 液中與(yu) 疊氮化物綴合。取決(jue) 於(yu) 使用的疊氮化物，反應將在室溫下在4-17小時內(nei) 完成。Glen Gel-Pak™上的簡單脫鹽使得產(chan) 品具有幾乎定量的結合效率。

注意：我們(men) 現在建議使用0.5M CSO的無水乙腈（40-4632-xx）完成含有DBCO-dT的寡核苷酸的合成。如果DBCO-dT經曆不超過8-10次循環，則可以通過碘氧化實現可接受的結果。