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PD-1 ENZYME IMMUNOASSAY TEST KIT Catalog Number: BC-1301

pd-1酶免疫測定試劑盒目錄編號：bc-1301

酶免疫法定量測定人血清和血漿中Pd-1濃度

隻作研究用途

不適用於(yu) 診斷程序

介紹

程序性細胞死亡蛋白1(pd-1，CD 279，pdd 1)是一種細胞表麵受體(ti) ，是調節T細胞炎症活動和維持免疫外周耐受的關(guan) 鍵。 係統(1)。pd-1可以與(yu) 配體(ti) pd-l1和pd-l2t相互作用。pd-1具有胞外IGV結構域、跨膜結構域和胞內(nei) 尾部兩(liang) 個(ge) 磷酸化位點(shp-1和shp-2)。 o下調免疫係統，抑製T細胞活性(2)。抗原識別後，活化的T細胞在其表麵表達pd-1，產(chan) 生幹擾素，誘導pd的表達。 -L1，從(cong) 而促進細胞凋亡或細胞死亡。(3)當被腫瘤細胞劫持時，pd-1配體(ti) 的異常表達抑製免疫調節的T細胞活化，導致疾病進展。 （表示方向）向 (4).

血清和血漿中Pd-1水平升高與(yu) 類風濕關(guan) 節炎和皮膚硬化有關(guan) (5，6)。Pd-1主要由腫瘤浸潤的T細胞(7)表達.進一步區域 研究表明，使用針對pd-1免疫檢查點的單克隆抗體(ti) 有助於(yu) 在理解和治療黑色素瘤和其他vario等癌症方麵取得突破性進展。 美國非小細胞肺癌(4)。

測定原理

pd-1酶聯免疫吸附試驗是以固相酶聯免疫吸附試驗為(wei) 基礎的.該檢測係統使用了針對不同抗原決(jue) 定的*的單克隆抗體(ti) 對。 pd-1分子上的NT。用一種小鼠抗PD-1單克隆抗體(ti) 進行固相固定(在微滴度井上).另一種與(yu) 辣根堿結合的單克隆抗pd-1抗體(ti) 過氧化物酶(HRP)存在於(yu) 酶的共軛溶液中。測試樣本被允許與(yu) 這兩(liang) 種抗體(ti) 依次反應，導致pd-1分子被夾在固體(ti) ph之間。 ASE和酶解抗體(ti) 。在室溫下進行兩(liang) 次單獨的60分鍾孵育後，用洗滌緩衝(chong) 液衝(chong) 洗水井，除去未結合的標記抗體(ti) 。添加了TMB試劑 D在黑暗條件下孵育20分鍾，形成藍色。隨著停止解決(jue) 方案的添加，顏色開發停止，將顏色更改為(wei) 黃色。c Pd-1的濃度與(yu) 樣品的顏色強度成正比.在450 nm處分光度法測定吸光度。

提供的試劑和材料

抗體(ti) 包被井(1板，96井)微滴度井，用小鼠單克隆抗pd-1包被。

含防腐劑的磷酸鹽緩衝(chong) 液-BSA溶液中50 ng/ml Pd-1標準品(0.5 mL/小瓶)

標準稀釋劑和樣品稀釋劑(30 mL/瓶，1瓶)含有含防腐劑的磷酸鹽緩衝(chong) 液-bsa溶液。

酶結合試劑(12 mL/小瓶，1小瓶)含有與(yu) 辣根過氧化物酶結合的小鼠單克隆抗pd-1。

20倍洗滌劑磷酸鹽緩衝(chong) 液(50 mL/瓶，1瓶)

TMB試劑(11 mL/瓶，1瓶)含有一步TMB溶液。

停液(11 mL/瓶，1瓶)含有稀釋鹽酸(1NHCl)

貯藏條件

將未打開的工具包保存在2-8°C，收到後，當它沒有使用，直到到期顯示在工具包標簽上。有關(guan) 過期日期，請參閱包標簽。

將微滴度板放在一個(ge) 裝有幹燥劑的密封袋中，以盡量減少對潮濕空氣的暴露。

 試劑準備

1.所有試劑在使用前應允許達到室溫(18-25°C)。

2.對於(yu) 每次測試運行，準備一個(ge) 新的標準集。

3.用標準/樣品稀釋劑稀釋50~10 ng/mL。用標準/樣品稀釋劑製備10 ng/mL標準的雙倍係列稀釋劑：

a.10納克/毫升：0.12毫升50納克/毫升0.48毫升標準品/樣品稀釋劑

b.5納克/毫升：0.25毫升10納克/毫升標準品/樣品稀釋劑

c.2.5納克/毫升：0.25毫升5納克/毫升標準品/樣品稀釋劑

1.25ng/mL：0.25毫升2.5納克/毫升標準品/樣品稀釋劑

e.0.625 ng/mL：1.25ng/mL標準品/樣品稀釋劑0.25mL

f.0.313 ng/mL：0.25mL/0.625 ng/mL標準品/樣品稀釋劑2

標準稀釋劑0.156 ng/mL：0.313 ng/mL 0.25mL

i.0 ng/mL：0.25 mL標準稀釋劑

5.病人樣本在使用前需要稀釋4倍。製備一係列小管(即1.5 mL微離心管)，將60L血清與(yu) 180 L標準/樣品稀釋劑混合。

6.工作洗滌緩衝(chong) 器：從(cong) 20倍庫存中製備1倍洗滌緩衝(chong) 液。加入50毫升的20倍洗滌緩衝(chong) 液庫存到950毫升的直接水。工作洗滌緩衝(chong) 液在2~8°C溫度下穩定運行30天.注：任何晶體(ti) 這可能是由於(yu) 高鹽濃度的存在，必須在室溫下再溶解，然後再進行稀釋。

檢測程序

準備標準。見試劑準備。

稀釋樣品1：4稀釋。見試劑準備。

確保所需數量的塗層井在保持架。

配發Pd-1標準的100mL，並將樣品稀釋到適當的井中.

室溫(18-25°C)孵育60 min.

將培養(yang) 皿中的內(nei) 容物倒入廢容器中，將孵化器中的混合物移除。用300mL工作水洗緩衝(chong) 液衝(chong) 洗微滴水井5次。把水井打到吸水紙或紙上 r毛巾去除所有殘留水滴。

將Pd-1工作酶結合劑的100mL配伍到每口井中.

室溫(18-25°C)孵育60 min.

將培養(yang) 皿中的內(nei) 容物倒入廢容器中，將孵化器中的混合物移除。用300 ul工作水洗緩衝(chong) 液衝(chong) 洗微滴水井5次。把水井打到吸水紙或紙上 r毛巾去除所有殘留水滴。

在每口井中分配100mL TMB溶液。

室溫(18-25°C)孵育20分鍾.

通過在每口井中加入100mL的停止溶液來停止反應。

輕輕攪拌30秒。重要的是要確保所有的藍色*變成黃色。

14.在450 nm處讀取吸光度，15分鍾內(nei) 使用微滴度良好的閱讀器。

統計

計算每組參考標準、對照和樣品的平均吸光度值(OD 450)。

通過繪製每個(ge) 參考標準的平均吸光度(以納克/毫升為(wei) 單位)繪製在圖表紙上，並在垂直(Y)軸和濃度上繪製一條標準曲線。 在水平(X)軸上。

用每個(ge) 樣品的平均吸光度值，從(cong) 標準曲線上測定相應的Pd-1濃度(ng/mL)。視經驗和/或計算機可用情況而定 可以使用其他的數據縮減方法。

樣品的檢出值應乘以稀釋倍數為(wei) 4，得到Pd-1的結果為(wei) ng/ml。

標準曲線實例

一個(ge) 典型的標準運行結果，吸光度讀數在450 nm處顯示在Y軸上，而pd-1濃度顯示在X軸上。注：這條標準曲線是為(wei) 了說明 僅(jin) 用於(yu) 計算未知數，不應用於(yu) 計算未知數。每個(ge) 實驗室必須在每個(ge) 實驗中生成自己的數據和標準曲線。

工作特性

敏感，感受性

用2SD法測定的Pd-1酶聯免疫吸附試驗的低檢出濃度為(wei) 0.15ng/ml。

度，準確（性）

1. 在一次測定中，通過對三種不同樣品的重複測定，確定了內測精密度.批內可變性如下所示：

b.在一係列單獨校準的測試中，通過對三個(ge) 不同樣本的重複測量，確定了運行間精密度。批間變異顯示b。 below在下麵，到下麵

1.回收率和線性研究。回收樣品加入已知的Pd-1水平，並一式兩(liang) 份進行測定。平均回收率為(wei) 105.3%。

b. 對三個(ge) 樣品進行連續稀釋，以確定線性度。平均回收率為(wei) 99.6%。

參考

費夫，B.T.，&Pauken，K.E.(2011年)。PD-1通路在自身免疫和外周耐受中的作用。“紐約科學院年鑒”，1217(1)，45-59。

Riella，L.V.，Paterson，A.M.，Sharpe，A.H.，&Chandraker，A.(2012)。PD-1通路在免疫應答中的作用。美國移植雜誌：美國社會(hui) 雜誌 移植和美國移植外科醫生協會(hui) ，12(10)，2575-2587。

Zak，Krzysztof&Kitel，Radosław&Przetocka，Sara&Golik，Przemysław&Guzik，Katarzyna&Musielak，Bogdan&D mling，Alexander&Dubin，Grzegorz&Holak，Tad。(2015年)。胡氏情結結構 人類編程死亡1，pd-1，及其配體(ti) PD-L1。結構。23.。10.1016/j.str.2015.09.010。

Zoran Gatalica，卡麗(li) ·斯奈德，托德·馬尼，阿納托爾·加紮爾普爾，丹尼爾·霍特曼，年青肖，佩吉·奧夫伯格，因加羅斯，加吉·巴蘇，塞米爾·弗拉尼茨，亨利·林奇，丹尼爾·馮(feng) 霍夫和奧米德·哈米 d.程序化細胞死亡1(PD-1)及其配體(ti) (PD-L1)在常見癌症中的作用及其與(yu) 分子腫瘤類型的關(guan) 係。癌症流行病學研究2014年12月1日(23)(12)2965-2970。

Greisen，S.，Rasmussen，T.，Stengaard-Pedersen，K.，Hetland，M.，H rselv-Petersen，K.，Hvid，M.，&Deleuran，B.(2013年)。可溶性程序性死亡1(spd-1)的增加與(yu) 疾病活動有關(guan) 。 早期類風濕關(guan) 節炎的影像學進展。斯堪的納維亞(ya) 風濕病學雜誌，43(2)，101-108。

Yanaba，K.，Hayashi，M.，Yoshihara，Y.，&Nakagawa，H.(2016)。係統性硬化症患者血清可溶性程序性死亡-1和程序性死亡配體(ti) -1水平與(yu) 皮膚硬化程度的關(guan) 係 。皮膚科雜誌，43(8)，954-957。

7.Ahmadzadeh，M.，Johnson，L.A.，Heemskerk，B.，Wunderlich，J.R.，Dudley，M.E.，White，D.E.，&Rosenberg，S.A.(2009年)。腫瘤抗原特異性CD8 T細胞浸潤腫瘤高表達水平 Pd-1的LS和功能受損。血液，114(8)，1537-1544。

心髒標誌物：酶免疫測定（EIA）試劑盒

FDA清除並且CE標記

僅供研究使用

生育力：酶免疫測定（EIA）試劑盒

FDA清除並且CE標記

僅供研究使用

其他分析物

FDA清除並且CE標記

僅供研究使用

類固醇：酶免疫測定（EIA）試劑盒

FDA清除並且CE標記

甲狀腺：酶免疫測定（EIA）試劑盒

FDA清除並且CE標記

僅供研究使用

腫瘤標誌物：酶免疫測定（EIA）試劑盒

FDA清除並且CE標記

供研究使用

TORCH和傳染病

僅供研究使用

骨代謝

僅供研究使用

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