BIOCHECK Inc.是新抗體(ti) 發現和免疫測定開發服務的綜合提供商。利用我們(men) 專(zhuan) 有的B細胞克隆技術，我們(men) 可以直接富集陽性B細胞，分離IgG基因並表達用於(yu) 各種應用的重組抗體(ti) 。我們(men) 還是免疫診斷領域的開發商和製造商，在將新的IVD產(chan) 品推向市場方麵擁有豐(feng) 富的經驗。除了ELISA之外，我們(men) 現在還包括使用Simoa™技術（單分子陣列）進行超靈敏檢測的分析開發，這是一種檢測低豐(feng) 度生物標記物的強大工具。

PD-L1 ENZYME IMMUNOASSAY TEST KIT Catalog Number: BC-1303

pd-l1酶免疫測定試劑盒目錄編號：bc-1303

酶免疫法定量測定人血清和血漿中Pd-L1的濃度

隻作研究用途

不適用於診斷程序

介紹

程序性死亡受體-配體1(pd-l1，b7-h1，cd 274)是b7家族的一種生物標誌物，在多種細胞上表達，並在多種促炎細胞因子(如int)作用下被上調。 ERFERFON GAMMA 1，2，3。pd-L1與耗盡的T細胞表達的輔助受體pd-1相互作用，通過減少T細胞受體介導的增殖，促進免疫抑製性腫瘤微環境的形成。 N和細胞因子產生4，5。pd-1/pd-l1相互作用在免疫編輯過程中起著免疫檢查點的作用，宿主免疫係統在此過程中消除了高免疫原性腫瘤。 使較少的免疫原性腫瘤逃避2，6。包括黑色素瘤、腎細胞癌、非小細胞肺癌、卵巢癌和結直腸癌在內的多種實體腫瘤類型利用pd-1/pd-L。 1免疫編輯機製。目前的治療主要集中在阻斷PD-1/Pd-L1相互作用，通過抑製Pd-1來減少腫瘤的逃逸，而Pd-L1和1，2則是新的研究重點。

測定原理

pd-L1酶聯免疫吸附試驗基於(yu) 固相酶聯免疫吸附試驗的原理.該檢測係統利用一種*的單克隆抗體(ti) 對，針對一種*的抗原性測定方法。 Pd-L1分子上的螞蟻。用一種小鼠抗Pd-L1單克隆抗體(ti) 進行固相固定化(在微滴度井上)。另一種與(yu) 馬血清結合的單克隆抗pd-l1抗體(ti) 盤過氧化物酶(HRP)存在於(yu) 酶的共軛溶液中。測試樣本被允許與(yu) 這兩(liang) 種抗體(ti) 順序反應，導致pd-l1分子被夾在溶膠之間。 ID期和酶解抗體(ti) 。在室溫下進行兩(liang) 次單獨的60分鍾孵育後，用洗滌緩衝(chong) 液衝(chong) 洗水井，除去未結合的標記抗體(ti) 。添加TMB試劑 ED在黑暗條件下孵育20分鍾，形成藍色。隨著停止解決(jue) 方案的添加，顏色開發停止，將顏色更改為(wei) 黃色。 Pd-L1的濃度與(yu) 樣品的顏色強度成正比。在450 nm處分光度法測定吸光度。

提供的試劑和材料

1.抗體(ti) 包被井(1板，96井)微滴度井，用小鼠單克隆抗pd-l1包被。

2.20 ng/ml Pd-L1標準品(0.5 mL/小瓶)20 ng/mL Pd-L1在含防腐劑的磷酸鹽緩衝(chong) 液-BSA溶液中

3.標準稀釋劑和樣品稀釋劑(30 mL/瓶，1瓶)含有含防腐劑的磷酸鹽緩衝(chong) 液-bsa溶液。

4.酶結合試劑(12 mL/小瓶，1小瓶)含有與(yu) 辣根過氧化物酶結合的小鼠單克隆抗pd-l1。

20倍洗滌劑磷酸鹽緩衝(chong) 液(50 mL/瓶，1瓶)

TMB試劑(11 mL/瓶，1瓶)含有一步TMB溶液。

1. 停液(11 mL/瓶，1瓶)含有稀釋鹽酸(1NHCl)

貯藏條件

1.將未打開的工具包保存在2-8°C，收到後，當它沒有使用，直到到期顯示在工具包標簽上。有關過期日期，請參閱包標簽。

2.將微滴度板放在一個裝有幹燥劑的密封袋中，以盡量減少對潮濕空氣的暴露。

試劑準備

1.所有試劑在使用前應允許達到室溫(18-25°C)。

2.對於每次測試運行，準備一個新的標準集。

3.稀釋20 ng/mL標準品至5ng/mL。用標準/樣品稀釋劑製備5納克/mL標準的兩倍係列稀釋劑：

a.5 ng/mL：0.15mL 20 ng/mL標準品/樣品稀釋劑0.45mL

b.2.5納克/毫升：0.25毫升5納克/毫升標準品/樣品稀釋劑

c.1.25納克/毫升：0.25毫升2.5納克/毫升標準品/樣品稀釋劑

d.0.625 ng/mL：1.25ng/mL標準品/樣品稀釋劑0.25mL

e.0.313 ng/mL：0.25mL 0.625 ng/mL標準品/樣品稀釋劑

f.0.156 ng/mL：0.25mL 0.313 ng/mL標準稀釋劑

g.0.078 ng/mL：0.25mL 0.156 ng/mL標準稀釋劑

H.0 ng/mL：0.25 mL標準稀釋劑

5.病人樣本在使用前需要稀釋4倍。製備一係列小管(即1.5 mL微離心管)，將60L血清與180 L標準/樣品稀釋劑混合。

1. 工作洗滌緩衝器：從20倍庫存中製備1倍洗滌緩衝液。加入50毫升的20倍洗滌緩衝液庫存到950毫升的直接水。工作洗滌緩衝液在2~8°C溫度下穩定運行30天.注：任何晶體 這可能是由於高鹽濃度的存在，必須在室溫下再溶解，然後再進行稀釋。

檢測程序

1.準備標準。見試劑準備。

2.稀釋樣品1：4稀釋。見試劑準備。

3.確保所需數量的塗層井在保持架。

4.配發Pd-L1標準的100mL，並將樣品稀釋到適當的井中.

5.室溫(18-25°C)孵育60 min.

6.將培養皿中的內容物倒入廢容器中，將孵化器中的混合物移除。用300mL工作水洗緩衝液衝洗微滴水井5次。把井打在吸水性紙或p上 錐度毛巾，以消除所有殘餘水滴。

7.將pd-L1工作酶結合劑的100mL分配到每口井中.

8.室溫(18-25°C)孵育60 min.

9.將培養皿中的內容物倒入廢容器中，將孵化器中的混合物移除。用300 ul工作水洗緩衝液衝洗微滴水井5次。把井打在吸水性紙或p上 錐度毛巾，以消除所有殘餘水滴。

10.在每口井中分配100mL TMB溶液。

11.室溫(18-25°C)孵育20分鍾.

12.通過在每口井中加入100mL的停止溶液來停止反應。

13.輕輕攪拌30秒。重要的是要確保所有的藍色*變成黃色。

1. 在450 nm處讀取吸光度，15分鍾內使用微滴度良好的閱讀器。

統計

1.計算每組參考標準、對照和樣品的平均吸光度值(OD 450)。

2.通過繪製每個參考標準的平均吸光度(以納克/毫升為單位)繪製在圖表紙上，在垂直(Y)軸上繪製吸光度，並繪製標準曲線。 水平(X)軸的接觸。

3.用每個樣品的平均吸光度值，從標準曲線上測定相應的Pd-L1濃度(ng/mL)。取決於經驗和/或Comput的可用性 可以采用其他的數據縮減方法。

4.得到的樣品值應乘以稀釋倍數為4，才能得到Pd-L1的結果納克/毫升。

標準曲線實例

一個典型的標準運行結果，吸光度讀數在450 nm處顯示在Y軸上，而pd-L1濃度顯示在X軸上。注：本標準曲線為圖示目的。 僅用於計算未知數，不應用於計算未知數。每個實驗室必須在每個實驗中生成自己的數據和標準曲線。

工作特性

用2SD法測定的Pd-L1酶聯免疫吸附試驗的低檢出濃度為(wei) 0.02ng/ml，低檢出濃度為(wei) 0.02ng/ml。

精度a.在一次測定中，通過對三種不同樣品的重複測定，確定了內(nei) 測精密度.批內(nei) 可變性如下所示：

b.在一係列單獨校準的測試中，通過對三個(ge) 不同樣本的重複測量，確定了運行間精密度。批間變異顯示b。 below在下麵，到下麵

1. 回收率和線性研究。回收樣品加入已知的Pd-L1水平，並一式兩份進行測定。平均回收率為90%。

b. 對三個(ge) 樣品進行連續稀釋，以確定線性度。平均回收率為(wei) 110.3%。

參考

1.赫布斯特，羅伊S.，等人。腫瘤患者對抗PD-L1抗體(ti) MPDL3280A的反應預測相關(guan) 。“自然”515.7528(2014年)：563。

2.帕特爾，桑迪普·普拉文和拉澤爾·庫茲(zi) 洛克。pd-L1的表達是腫瘤免疫治療中的一個(ge) 預測生物標誌物。分子癌症治療學14.4(2015)：847-856。

3.書(shu) 名/作者責任者：by L.靶向PD-1/B7-H1(PD-L1)通路，激活抗腫瘤免疫。免疫學新意見24.2(2012年)：207-212。

4.布蘭(lan) 克克裏斯汀和安德烈亞(ya) 斯·馬肯森。PD-L1/PD-1通路對T細胞衰竭的貢獻：慢性感染和腫瘤逃避的新研究進展。癌症免疫學 治療，療法，療效 56.

5(2007)：739-745。5.Barber，Daniel L.，等。慢性病毒感染時衰竭CD8 T細胞的功能恢複“自然”439.7077(2006年)：682。

6.Teng，Michele WL，等。根據T細胞浸潤和pd-L1分類癌症。癌症研究75.11(2015)：2139-2145。

心髒標誌物：酶免疫測定（EIA）試劑盒

FDA清除並且CE標記

僅供研究使用

生育力：酶免疫測定（EIA）試劑盒

FDA清除並且CE標記

僅供研究使用

其他分析物

FDA清除並且CE標記

僅供研究使用

類固醇：酶免疫測定（EIA）試劑盒

FDA清除並且CE標記

甲狀腺：酶免疫測定（EIA）試劑盒

FDA清除並且CE標記

僅供研究使用

腫瘤標誌物：酶免疫測定（EIA）試劑盒

FDA清除並且CE標記

供研究使用

TORCH和傳染病

僅供研究使用

骨代謝

僅供研究使用

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