ALSTEM VP100說明書

ALSTEM VP100說明書(shu)

ALSTEM是一家位於(yu) 灣區的早期生物技術公司，擁有快速擴展的產(chan) 品和服務組合，為(wei) 生物製藥和學術機構提供服務。受到加利福尼亞(ya) 幹細胞研究承諾的啟發，ALSTEM於(yu) 2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術專(zhuan) 業(ye) 知識的科學家創立。

Lentiviral Packaging Mix: #VP100

慢病毒包裝混合物：＃VP100

描述

慢病毒包裝混合物是一種即用型第三代基於(yu) HIV的慢病毒包裝係統，其中質粒表達慢病毒生產(chan) 所需的元件。為(wei) 了生產(chan) 高質量的慢病毒顆粒，所需要的隻是含有您感興(xing) 趣基因的慢病毒表達載體(ti) 。慢病毒包裝混合物含有必需的包裝載體(ti) ，其含有病毒結構蛋白和包膜載體(ti) 以表達水泡性口炎病毒糖蛋白（VSVG）。慢病毒包裝混合物是TAT獨立的，因為(wei) 它僅(jin) 支持具有嵌合5'LTR的慢病毒表達載體(ti) ，其中HIV啟動子被CMV或RSV替代。

• 概觀

慢病毒包裝混合物是第三代包裝質粒的優(you) 化配方，提供輔助功能以及產(chan) 生高滴度慢病毒所需的反式結構和複製蛋白。

1.將含有慢病毒顆粒的培養(yang) 基從(cong) 平板轉移到無菌容器中，並以300×g離心培養(yang) 基10分鍾以除去細胞碎片。

2.通過0.45μm過濾器過濾上清液。

3.將過濾的上清液轉移到無菌容器中，並向每4體(ti) 積的含有慢病毒的上清液中加入1體(ti) 積的冷的慢病毒沉澱溶液（4℃）。（實施例：5ml慢病毒沉澱溶液，含20ml病毒上清液）。

4.充分混合並冷藏3小時至過夜。與(yu) Lentivirus沉澱溶液混合的含有慢病毒的上清液在4°C下可穩定長達4天。

5.在4℃下以1500×g離心混合物30分鍾。離心後，慢病毒顆粒可在容器底部顯示為(wei) 米色或白色顆粒。

6.丟(diu) 棄上清液。通過以1500×g離心5分鍾來旋轉殘留溶液。通過抽吸去除所有的液體(ti) 痕跡，小心不要打擾顆粒中沉澱的慢病毒顆粒。

7.使用冷的無菌PBS或DMEM在4℃下以1/10至1/100的原始體(ti) 積重懸慢病毒顆粒。

8.在低溫小瓶中分裝並儲(chu) 存在-80°C直至準備使用。

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