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ALSTEM VP200說明書

發布時間：2018/10/23點擊次數：551

 

ALSTEM是一家位於(yu) 灣區的早期生物技術公司，擁有快速擴展的產(chan) 品和服務組合，為(wei) 生物製藥和學術機構提供服務。受到加利福尼亞(ya) 幹細胞研究承諾的啟發，ALSTEM於(yu) 2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術專(zhuan) 業(ye) 知識的科學家創立。

ALSTEM VP200說明書(shu)

Retroviral Packaging Mix: #VP200

逆轉錄病毒包裝混合物：＃VP200

描述

逆轉錄病毒包裝混合物提供了一種快速方便的方法，用於(yu) 產(chan) 生高滴度的無複製能力的逆轉錄病毒。這種基於(yu) Moloney鼠白血病病毒（MMLV）的包裝係統擁有您的靶細胞所需的理想宿主範圍。它是一種即用型逆轉錄病毒包裝混合物，含有VSVG，僅(jin) 需48小時即可產(chan) 生高滴度的逆轉錄病毒。這些必需的病毒結構基因的單獨表達通過小化細胞分裂過程中產(chan) 生的風險並降低產(chan) 生具有複製能力的病毒的機會(hui) 來確保對重組構建體(ti) 的安全性和控製。

     

 

產(chan) 品規格

產(chan) 品名稱

逆轉錄病毒包裝混合物

目錄 ＃

VP200

尺寸

200μl

運輸

環境溫度

儲(chu) 存和穩定性

儲(chu) 存在-20°C。根據指示儲(chu) 存，本產(chan) 品可穩定保存6個(ge) 月。應通過分成一次性等分試樣來小化凍融循環。將等分試樣儲(chu) 存在-20°C冰箱中直至準備使用。

質量控製

每批逆轉錄病毒包裝混合物在使用人胚胎腎293細胞的轉染測定中進行功能測試。

安全須知

對於(yu) 含有BSL-2生物的所有材料，請遵循推薦的NIH指南。始終戴上手套，使用過濾的吸頭並在生物安全罩下工作。

限製使用

僅(jin) 供研究使用。不得用於(yu) 診斷或治療程序。

用法

對於(yu) 10厘米的逆轉錄病毒包裝，將7.5微克逆轉錄病毒表達載體(ti) 與(yu) 15微升逆轉錄病毒包裝混合物混合

協議

下載

 

  • 概觀

逆轉錄病毒包裝混合物是用於(yu) 產(chan) 生高滴度泛熱反轉錄病毒的優(you) 化配方。

  • 通過瞬時轉染實現10 7個感染單位/ ml的平均滴度
  • 簡單共轉染逆轉錄病毒包裝混合物和含有您感興趣的基因的表達載體
  • 產生自我失活的泛熱反轉錄病毒

 

條件

數量

組織培養(yang) 板大小

10厘米（每個(ge) 慢病毒載體(ti) 一個(ge) ）

要轉染的293T細胞數

4×10 6個(ge) 細胞

逆轉錄病毒包裝混合物的量

15μl

pRetro表達載體(ti) 的量

7.5微克

NanoFect的數量（Cat.no. NF100）

45μl

無血清DMEM的量

500μl

 

第1天：

1.在10cm培養(yang) 皿中培養(yang) 293T細胞（每10cm培養(yang) 皿約4×10 6個(ge) 細胞）。

第2天：

2.檢查以確保細胞達到70-80％匯合。

3.對於(yu) 每個(ge) 10cm培養(yang) 皿，準備轉染複合物如下：

一個(ge) 。1.5ml試管A：在0.5ml無血清培養(yang) 基（例如DMEM）中稀釋7.5μg質粒和15μl逆轉錄病毒包裝混合物。通過移液混合。

灣 1.5ml離心管中B：稀釋NanoFect的45μL TM轉染試劑在0.5ml無血清培養(yang) 基中並輕輕混合。

C。將NanoFect / DMEM添加到 / DMEM溶液中。通過渦旋混合5-10秒，然後在室溫下孵育DMEM-質粒-NanoFect混合物15分鍾。

4.將來自步驟3的完整轉染複合物逐滴添加至細胞，並旋轉培養(yang) 皿以將轉染複合物均勻地分散在平板中。

5.將板在37°C孵育過夜。

第3天：

6.用10ml新鮮培養(yang) 基更換上清液。

注意：您可以用20μlTiterMax（500X，ALSTEM，目錄號VB100）補充培養(yang) 基，以提高病毒滴度。

7.在37°C孵育24小時。

第4天（1 ST收獲）：

8.將含有逆轉錄病毒的上清液收集到50ml無菌帶蓋的錐形離心管中。

9.在4℃下以3000rpm離心上清液15分鍾以沉澱細胞碎片。

10.通過低蛋白結合0.45-μm無菌過濾器過濾澄清的上清液。

11.病毒已準備好進行感染，純化，或者可以在-80°C下作為(wei) 病毒原液儲(chu) 存，以備將來使用。等分體(ti) 積優(you) 選用於(yu) 儲(chu) 存以降低凍融循環中的病毒滴度損失。

12.如果需要第二次收獲，在次收獲後向細胞中加入10ml*培養(yang) 基，並將培養(yang) 皿放回37℃培養(yang) 箱中。

注意：您可以用20μlTiterMax（500X，ALSTEM，目錄號VB100）補充培養(yang) 基，以提高病毒滴度。

第5天（第二次收獲）

13.第二次收獲可在第5天完成，步驟8-11之後。

14.為(wei) 了濃縮病毒，將1體(ti) 積的逆轉錄病毒濃縮溶液（ALSTEM，cat.no.VC200）加入到4體(ti) 積的病毒上清液中，並充分混合。

15.將混合物置於(yu) 4°C冰箱中過夜，第二天將病毒沉澱。有關(guan) 詳細信息，請參閱用戶手冊(ce) 。

 

貨號品名規格品牌
VB100ViralBoost1毫升alstembio
VC100慢病毒沉澱解決方案100毫升/ 250毫升/ 500毫升alstembio
V020TransPlus™病毒轉導增強劑100μl/500μlalstembio
CILV02hTERT細胞永生化試劑盒5 x20μlalstembio
VC200逆轉錄病毒沉澱解決方案100毫升/ 250毫升/ 500毫升alstembio
VP100慢病毒包裝混合物200μlalstembio
VP200逆轉錄病毒包裝混合物200μlalstembio

 

 

 

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