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alstembio NF100說明書

發布時間：2018/10/23點擊次數：515

 

ALSTEM是一家位於(yu) 灣區的早期生物技術公司，擁有快速擴展的產(chan) 品和服務組合，為(wei) 生物製藥和學術機構提供服務。受到加利福尼亞(ya) 幹細胞研究承諾的啟發，ALSTEM於(yu) 2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術專(zhuan) 業(ye) 知識的科學家創立。

 

NanoFect轉染試劑：＃NF100

產(chan) 品描述

NanoFect Transfection Reagent是一種*的聚合物混合物，與(yu) 的脂質轉染試劑盒相比，可以更低的成本向細胞提供更多的和siRNA。NanoFect™是一種功能強大，適用範圍廣泛的轉染試劑，可有效，可重複轉染。

 

產(chan) 品規格

產(chan) 品名稱

NanoFect轉染試劑

目錄 ＃

NF100

尺寸

1毫升

運輸

環境溫度

儲(chu) 存和穩定性

儲(chu) 存在4°C。根據指示儲(chu) 存，本產(chan) 品可穩定保存6個(ge) 月。

質量控製

每批NanoFect™轉染試劑均在人胚胎腎293細胞的轉染試驗中進行功能測試。

限製使用

僅(jin) 供研究使用。不得用於(yu) 診斷或治療程序。

協議

下載

 

  • 概觀
  • 程序

NanoFect試劑在和RNA存在下自組裝納米顆粒。這些複合物很容易被靶細胞吸收，從(cong) 而有效地進行基因遞送。由於(yu) NanoFect在抗生素和血清存在下起作用，因此無需更換培養(yang) 基。這種易於(yu) 使用的方案，在直接添加到靶細胞之前快速一步孵育15分鍾，使NanoFect非常適合高通量轉染實驗。

 

 

 

為(wei) 了高轉染效率和低毒性，以高密度轉染細胞。建議使用50-80％的融合度。

細胞應在轉染前18至24小時接種，以使細胞密度在轉染時達到50~80％匯合。在轉染前2小時，向每個(ge) 孔中新鮮加入含有血清和抗生素的*培養(yang) 基。

以下方案用於(yu) 在24孔板中轉染，參見表1用於(yu) 其他培養(yang) 形式的轉染。

1.對於(yu) 每個(ge) 孔，在轉染前2小時新鮮加入0.5ml正常生長培養(yang) 基（抗生素不影響結果）。

2.對於(yu) 每個(ge) 孔，在50μl不含血清的DMEM中稀釋0.5μg，並輕輕混合。

3.將1μlNanoFect試劑加入另一個(ge) 含有50μl不含血清的DMEM的試管中，輕輕混勻。

4.將NanoFect / DMEM添加到 / DMEM溶液中。通過渦旋混合5-10秒。

5.在室溫下孵育約15分鍾，以使NanoFect / 複合物自組裝。

6.將100μlNanoFect/ 混合物逐滴添加到每個(ge) 孔中的細胞中，並通過輕輕旋轉平板使其均質化。

7.將平板放回細胞培養(yang) 箱中。

8.轉染後24至48小時檢查轉染效率。

表1.不同文化的推薦量

文化菜表麵

麵積（cm 2）

細胞數量

中等體(ti) 積（ml）

質粒（微克）

NanoFect（μl）

稀釋劑體(ti) 積（μl）

96孔

0.3

1-1.5x104

0.1

0.1

0.3

10

48孔

1

2.5-5x104

0.25

0.25

0.75

20

24孔

2

0.5-1x105

0.5

0.5

1.5

50

12孔

4

1-2x10 5

1

1

3

100

6孔/ 35毫米

9.5

2-4x10 5

2

2.5

7.5

200

60毫米/ T25

28

5-10x105

五

6-8

15-24

300

100毫米/ T75

79

1.5-3x106

10

15-20

40-60

500

150毫米/ T150

153

5-9x10 6

20

25-40

65-120

1000

注意：對於(yu) 不同的細胞類型，NanoFect（μL）：（μg）的適合比例約為(wei) 3：1。我們(men) 建議將NanoFect（μL）：（μg）比例為(wei) 2：1作為(wei) 起點，通常可以提供令人滿意的轉染效率和不可見的細胞毒性，但NanoFect的量可以從(cong) 2到4μl/μg調整，具體(ti) 取決(jue) 於(yu) 要轉染的細胞係。為(wei) 確保NanoFect / 複合物顆粒的宜尺寸，我們(men) 建議使用含有高葡萄糖的無血清DMEM稀釋和NanoFect Reagent。

貨號品名規格品牌
VB100ViralBoost1毫升alstembio
VC100慢病毒沉澱解決方案100毫升/ 250毫升/ 500毫升alstembio
V020TransPlus™病毒轉導增強劑100μl/500μlalstembio
CILV02hTERT細胞永生化試劑盒5 x20μlalstembio
VC200逆轉錄病毒沉澱解決方案100毫升/ 250毫升/ 500毫升alstembio
VP100慢病毒包裝混合物200μlalstembio
VP200逆轉錄病毒包裝混合物200μlalstembio
NF100NanoFect轉染試劑1毫升alstembio

 

 

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