BioGrammatics PS005-01說明書

BioGrammatics PS005-01說明書(shu)

BioGrammatics—糖基化畢赤酵母表達體(ti) 係

Pichia酵母菌屬的巴斯德畢赤酵母是當今常用的單細胞真核表達體(ti) 係，是載體(ti) 構建、表達、發酵和純化重組蛋白和肽的優(you) 良體(ti) 係。BioGrammatics在畢赤酵母的生命科學研究利用領域有著悠久的曆史和豐(feng) 富的經驗，通過與(yu) Research Corporation Technologies（RCT）合作開發出GlycoSwitch®技術，利用該技術可以在畢赤酵母中表達的蛋白加以改性糖基化修飾。糖基化可影響蛋白質折疊，穩定性和蛋白質 - 蛋白質相互作用，因此利用GlycoSwitch®技術可設計具有更多“人類”糖基化特征的蛋白質，用以研發適用於(yu) 人類的的生物藥物，以及改良常規重組蛋白質。目前BioGrammatics可提供的基於(yu) 畢赤酵母的產(chan) 品包括快速簡單的蛋白質表達、分子表達工具下的菌株設計（如強大的嚴(yan) 格調控的啟動子，的分泌基因組操作）、大規模高細胞密度酵母發酵（> 700 g / l wcw，200k升）、特定的酵母發酵條件設計、真核蛋白質加工（折疊，分泌，糖基化）及酵母遺傳(chuan) 學分析等服務。

SuperMan5 (his—)

Description:

GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (histidine auxotroph)

描述：

GlycoSwitch ®應變，曼5 N-連接的寡糖的結構（組氨酸營養(yang) 缺陷型）

SuperMan5（his-），Och1-破壞與(yu) pGAP-甘露糖苷酶表達盒，殺稻瘟素抗性）。GS115（his4-），來自裏氏木黴的α1,2-甘露糖苷酶，由具有殺稻瘟素抗性基因的質粒上的GAP啟動子調節，破壞SuperMan5基因組中的Och1基因。

BioGrammatics公司產(chan) 品：

一、畢赤酵母表達載體(ti)

重組蛋白在畢赤酵母中的表達常見於(yu) 表達載體(ti) 整合到畢赤酵母基因組中，基因組整合導致目的基因在畢赤酵母中穩定表達。通過大規模的表達菌株發酵可生產(chan) 大量的目的蛋白質。基於(yu) 目的蛋白和基因的自身特異性，在載體(ti) 設計時需要考慮以下因素：1）胞內(nei) 表達或者分泌表達；2）適宜的啟動子（誘導型，組成型，強，弱）；3）選擇標記；4）特定基因/ （開放閱讀框）ORF序列；5）表達盒在畢赤酵母基因組中適的位置。

BioGrammatics在畢赤酵母表達載體(ti) 研究領域擁有豐(feng) 富的經驗，創建並測試了大量的表達載體(ti) ，以優(you) 化數百種基因的表達和用於(yu) 特定的應用，包括細胞內(nei) 和細胞外表達，膜蛋白的表達，高水平蛋白質生產(chan) 以及蛋白質在代謝途徑中的表達和支持重組蛋白質產(chan) 物宜加工程度的蛋白質。

BioGrammatics采用的pJ載體(ti) （pJ – vectors, Jeannies vectors)是4-5kb的質粒，帶有氨苄青黴素篩選基因和“無縫”克隆方案。克隆方案基於(yu) 在其識別序列之外切割的IIS型限製酶，因此，可在終表達載體(ti) 中去除限製酶結合位點，並且可以在不多加入不需要的密碼子的情況下加入ORF。

二、畢赤酵母表達菌株

BioGrammatics提供BG和GlycoSwitch®菌株兩(liang) 種畢赤酵母表達菌株係列。其中BG菌株來源於(yu) 野生巴斯德畢赤酵母菌株，初於(yu) 1940年由加利福尼亞(ya) 的Herman Phaff分離。我們(men) 使用Illumina HiSeq技術對Phaff菌株進行單菌落分離，成為(wei) BioGrammatics起始的原始菌株BG08，BG08在經過改良以消除細胞質殺傷(shang) 質粒的能力產(chan) 生野生型表達菌株BG10。此後除了BG09之外，BG係列中的所有後續菌株均通過的BG10基因組操作衍生而來。 而BG09是BG08的一個(ge) 特定變體(ti) ，已開發用於(yu) 在特定的胰蛋白酶切割位點標記13C同位素後進行質譜分析。

除BG係列外，BioGrammatics還是RCT的GlycoSwitch®菌株經銷商。 GlycoSwitch®菌株係列源於(yu) 20世紀70年代的巴斯德畢赤酵母GS115菌株，是Phaff菌株的突變分離株之一，選擇用於(yu) 組氨酸營養(yang) 缺陷型培養(yang) 。初的GlycoSwitch®Man5菌株來源於(yu) 比利時根特大學和法蘭(lan) 德斯生物技術研究所（VIB）的Roland Contreras博士，Nico Callewaert博士及其同事的合作分離。 SuperMan5菌株是由BioGrammatics研發的GlycoSwitch®Man5的後續修飾菌株，其突變體(ti) och1基因座的所有同源性區域基因已被去除以防止其通過同源重組而逆轉為(wei) 野生型。

三、具有修飾糖基化的畢赤酵母菌株 - GlycoSwitch®技術。

GlycoSwitch係列菌株是與(yu) BioGrammatics與(yu) Research Corporation Technologies（RCT）合作，提供個(ge) 可進行糖基化修飾的畢赤酵母表達載體(ti) 。糖基化可影響蛋白質折疊，穩定性和蛋白質 - 蛋白質相互作用，因可用於(yu) 設計生成具有更多“人類”糖基化的蛋白質和生物製藥，以及改良其他類別的重組蛋白質。其核心GlycoSwitch®菌株具有中心聚糖加工酶（OCH1），可阻止聚糖延伸，並表達外源甘露糖苷酶以將現有聚糖修剪成更均勻的Man5結構。此外，BioGrammatics還可提供基於(yu) GlycoSwitch®技術的定製化研發合同服務，使用BioGrammatics公司的豐(feng) 富的Pichia專(zhuan) 業(ye) 技術為(wei) 客戶提供特定應用的量身定製糖蛋白。

四、畢赤酵母表達係統培養(yang) 基

該係列產(chan) 品於(yu) 畢赤酵母表發體(ti) 係發酵培養(yang) 或擴增，包括幹粉和濃縮液，用於(yu) 配製100ml和2.5L的培養(yang) 液。

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