advansta K-11054-010說明書

SpectraDye抗體標記試劑盒

隻需一個(ge) 簡單步驟即可製作自己的熒光抗體(ti) 。

• 快速簡便 - 30分鍾內一步貼標
• Versatile - 標記抗體與免疫熒光顯微鏡，流式細胞術，蛋白質印跡兼容
• 靈活 - 從6種常用熒光染料中選擇
• 節省時間和金錢 - 沒有輔助或額外步驟，一旦您標記您的主要
• 保存抗體 - 標記反應隻需要10μg抗體

試劑盒包括：
抗體(ti) 標記緩衝(chong) 液
SpectraDye Dye Solution * 
淬滅溶液
中和緩衝(chong) 液

足夠的試劑可以標記多達1毫克的抗體(ti)
*除了試劑盒K-11060-010

描述

SpectraDye抗體(ti) 標記試劑盒包括足夠的試劑，可以標記多達1 mg的抗體(ti) 。SpectraDye染料試劑盒包含抗體(ti) 標記緩衝(chong) 液，SpectraDye染料溶液，淬火溶液和中和緩衝(chong) 液。用戶提供的染料套裝不含染料，但含有高質量的DMSO，可用於(yu) 製備自己的染料溶液。

什麽是SpectraDye抗體標記試劑盒有用嗎？

基於(yu) 免疫熒光的實驗的較低背景：使用二抗可導致高的非特異性結合和低再現性。切換到直接標記的一抗可以改善您的結果。

單色熒光應用：直接標記抗體(ti) 可提高重複性，並允許在各種應用中使用相同的抗體(ti) 來驗證結果。

多色熒光應用： SpectraDye抗體(ti) 標記試劑盒有6種染料可供選擇，具有極大的靈活性，而且由於(yu) 您不需要二抗，因此您的一抗的種類無關(guan) 緊要。 

標簽反應涉及什麽？

標簽反應確實快速而簡單。首先將PBS中的抗體(ti) 稀釋至1mg / ml。接下來，將25μl抗體(ti) 標記緩衝(chong) 液加入100μl抗體(ti) 溶液中。通過上下移液*混合。向反應中加入12μl染料溶液並通過移液管混合。在室溫下孵育30分鍾。其他推薦步驟：向反應混合物中加入3μl淬火溶液，在室溫下孵育5分鍾; 然後，向反應混合物中加入8μl中和緩衝(chong) 液。抗體(ti) 被標記並準備使用。

實驗應用：

免疫熒光顯微鏡：在同一載玻片上分析多種抗原時，減少非特異性結合並消除物種交叉反應。

通過使用高質量的單克隆抗體(ti) 增加多色染色載玻片的特異性。將HeLa細胞固定在玻璃蓋玻片上，然後用中性驢血清封閉。然後用一組高親(qin) 和力SpectraDye標記的小鼠單克隆抗體(ti) 同時染色細胞。用SpectraDye-490（品紅色）標記抗GAPDH抗體(ti) ，用SpectraDye-650（紅色）標記抗肌動蛋白抗體(ti) ，用SpectraDye-550（綠色）標記抗微管蛋白抗體(ti) 。細胞核用DAPI（藍色）染色。

流式細胞儀(yi) ：   使用您自己的熒光標記的一抗，簡化流式細胞儀(yi) 檢測，降低可變性，提高數據質量。

SpectraDye抗體(ti) 標記試劑盒產(chan) 生的抗體(ti) 可與(yu) 市售的熒光抗體(ti) 相媲美。HeLa細胞在補充有FBS和青黴素/鏈黴素的DMEM培養(yang) 基中培養(yang) 。沉澱細胞並用4％多聚甲醛固定。將HeLa細胞重懸於(yu) PBS + 0.1％Triton中，並以0.33μg/μL加入SpectraDye標記的抗體(ti) 。將抗體(ti) 在環境溫度下孵育30分鍾，然後用1X PBS洗滌兩(liang) 次。使用LSRFortessa獲取數據。黑色填充的直方圖表示抗體(ti) 染色的細胞。黑色襯裏，灰色直方圖表示未染色的控製。

Western Blotting：節省寶貴的時間，因為(wei) 不再需要二抗孵育和洗滌步驟。

使用SpectraDye標記的一抗在單個(ge) 熒光Western印跡實驗中檢測兩(liang) 種或更多種蛋白質。將轉鐵蛋白（500ng /泳道）和GAPDH（500,167,56和19ng /泳道）轉移至PVDF膜，用用SpectraDye-IR800標記的兔抗轉鐵蛋白抗體(ti) 和用其標記的小鼠抗GAPDH抗體(ti) 檢測。 SpectraDye-IR700。