xpressbio XPEH0852說明書(shu)

Human OAS1 (2'-5'-oligoadenylate synthase 1) ELISA Kit

人OAS1（2'-5'-寡腺苷酸合成酶1）ELISA試劑盒

目錄號：XPEH0852
尺寸：48t/ 96t
反應性：人
範圍：1.56-100ng/ml
靈敏度：<0.938ng/ml
應用：用於(yu) 血清、血漿、組織勻漿等中OAS1的定量檢測
生物流體(ti) 。
儲(chu) 存：4°C，6個(ge) 月
注：僅(jin) 供研究使用。
xpressbio XPEH0852成套元件

化驗原理
本試劑盒基於(yu) 三明治酶聯免疫吸附測定技術。將抗OAS1抗體(ti) 預塗於(yu) 96孔板上。生物素結合抗OAS1抗體(ti)
用作檢測抗體(ti) 。標準品、試樣及生物素共軛檢測添加和未結合的結合物用洗滌緩衝(chong) 液洗滌掉。TMB基板
用於(yu) 觀察HRP酶促反應。TMB被HRP催化產(chan) 生藍色。
添加酸性停止溶液後變為(wei) 黃色的產(chan) 品。黃色的密度是
與(yu) 盤中采集的OAS1樣本量成比例。讀取O.D.吸光度
在微板閱讀器中450納米，然後可以計算出OAS1的濃度。
使用注意事項
1。檢驗實驗操作的有效性和樣品稀釋的適宜性
比例、中試使用標準和少量樣品
推薦。
2。打開後和使用前，保持板幹燥。
三。在使用該套件之前，旋轉管並將所有部件降到管底部。
4。儲(chu) 存TMB試劑時要避光。
5。洗滌過程非常重要，不充分洗滌容易造成假陽性。
6。建議對標準測試和樣品測試進行重複試井。
7。不要讓微量板在分析時幹燥，因為(wei) 幹板會(hui) 使活性成分失活。
板。
8。不要重複使用和管子以避免交叉汙染。
9。避免同時使用不同批次的試劑。
所需但未提供的材料
1。微板閱讀器（波長：450納米）
2。37°C培養(yang) 箱
三。自動洗板機
4。精密單通道和多通道移液管及一次性針頭
5。清潔管和eppendorf管
6。去離子水或蒸餾水
手洗
在不接觸側(ce) 壁的情況下丟(diu) 棄板中的溶液。把盤子拍打在吸收劑上
濾紙或其他吸收性材料。用350ul洗滌緩衝(chong) 液*填充每口井，並
浸泡1至2分鍾，然後從(cong) 盤子中吸取內(nei) 容物，然後將盤子拍打在吸收劑上。
濾紙或其他吸收性材料。再重複此步驟兩(liang) 次，總共
三洗。

自動清洗
抽幹所有井，然後用350ul洗滌緩衝(chong) 液清洗三次。後一次清洗後，
將板倒置，並將板拍打在吸收性濾紙或其他吸收性材料上。它是
建議將墊圈設置為(wei) 浸泡1分鍾。
樣品收集和儲(chu) 存
收集後立即隔離試樣，然後立即分析（2小時內(nei) ）。或
等分並長期保存在-20°C。避免多次凍融循環。
血清：允許樣品在室溫下凝塊2小時或在4℃前過夜。
以大約1000×g的速度離心20分鍾。收集上清液並攜帶
馬上化驗出來。采血管應是一次性的、非致熱的，並且
非內(nei) 毒素。
血漿：用EDTA-NA2作為(wei) 抗凝劑收集血漿。離心樣品15個(ge)
在收集後30分鍾內(nei) ，在2-8°C下在1000×g條件下保持分鍾。收集上清液
立即進行化驗。避免溶血，高膽固醇樣品。
組織勻漿：一般情況下，溶血性血液可能會(hui) 影響結果，因此
應該用冰冷的PBS（0.01m，ph=7.4）衝(chong) 洗組織，以清除多餘(yu) 的血液。
*地。紙巾應稱重，然後切碎成小塊。
在PBS中均勻化（體(ti) 積取決(jue) 於(yu) 組織的重量。9毫升PBS
適用於(yu) 1克組織塊。建議加入一些蛋白酶抑製劑
在冰上放一個(ge) 玻璃均質器。為(wei) 了進一步破壞細胞，你可以用超聲波
懸浮液用超聲波細胞破壞或使其經受凍融循環。這個(ge)
然後勻漿以5000×g的速度離心5分鍾，得到上清液。
細胞培養(yang) 上清液：離心上清液20分鍾，去除不溶性雜質
在2-8°C的溫度下，在1000×g的溫度下收集細胞碎片。收集幹淨的上清液並進行分析。
立即。
其他生物液體(ti) ：在2-8°C下以1000×g的速度離心樣品20分鍾。收集
上清液，立即進行化驗。
樣品製備：樣品應清晰透明，離心去除。
懸浮固體(ti) 。
注：5天內(nei) 使用的樣品可在4°C下儲(chu) 存，否則必須儲(chu) 存樣品。
在-20°C（≤1個(ge) 月）或-80°C（≤2個(ge) 月）下，以避免生物活性和汙染的損失。
溶血樣品不適用於(yu) 本試驗。
樣品稀釋指南
終用戶應首先估計試驗樣品中目標蛋白的濃度，以及
選擇適當的稀釋因子，使稀釋後的目標蛋白濃度降到宜。
套件的檢測範圍。用提供的稀釋緩衝(chong) 液稀釋樣品，並進行幾次試驗
在實踐中可能是必要的。試樣必須與(yu) 稀釋緩衝(chong) 液充分混合。和
在實驗前，還應製作標準曲線和樣品。

高目標蛋白濃度（1000-10000ng/ml）：稀釋度：1:100。（即加入1μl
樣品放入99μl樣品/標準稀釋緩衝(chong) 液中。）
培養(yang) 基靶蛋白濃度（100-1000ng/ml）：稀釋：1:10（即加入10μl
樣品放入90μl樣品/標準稀釋緩衝(chong) 液中。）
低靶蛋白濃度（1.56-100ng/ml）：稀釋：1:2（即加入50μl樣品）
放入50μl樣品/標準稀釋緩衝(chong) 液中。）
目標蛋白濃度極低（≤1.56ng/ml）：不需要稀釋，或1:2稀釋。
試劑製備與(yu) 貯存
使用前將所有試劑置於(yu) 室溫。
1，Wash Buffer：
用去離子或蒸餾法將30毫升濃縮洗滌液稀釋至750毫升洗滌液中。
水。將未使用的溶液放回4°C。如果濃縮液中形成晶體(ti) ，可以加熱。
與(yu) 40°C水浴（加熱溫度不應超過50°C）混合，輕輕攪拌至
晶體(ti) *溶解了。溶液應冷卻至室溫，然後
使用。
2、標準：
1）。100ng/ml標準溶液：將1 ml樣品/標準稀釋緩衝(chong) 液加入其中
標準管，保持室溫10分鍾，並充分混合。
2）。50ng/ml→1.56ng/ml標準溶液：用50ng/ml、25ng/ml標記6個(ge) eppendorf管，
分別為(wei) 12.5ng/ml、6.25ng/ml、3.125ng/ml、1.56ng/ml。分份0.3毫升樣品/
標準稀釋緩衝(chong) 液進入每個(ge) 試管。將0.3ml上述100ng/ml標準溶液加入
第1管並*混合。將0.3毫升從(cong) 管轉移到第二管，並*混合。
將0.3ml從(cong) 第二管轉移到第三管，並*混合，依此類推。
注：標準溶液宜在2小時內(nei) 使用。標準溶液應為(wei)
4°C，多12小時。或在-20°C下儲(chu) 存48小時。避免反複的凍融循環。
3、生物素檢測抗體(ti) 工作液的製備
實驗前1小時內(nei) 準備。
1）計算工作液總體(ti) 積：0.1 ml/井×井數。（允許）
比總體(ti) 積多0.1-0.2毫升）
2）用抗體(ti) 稀釋液1:100稀釋生物素檢測抗體(ti) ，混合
*地。（即在99μl抗體(ti) 稀釋液中加入1μl生物素檢測抗體(ti) 。）

4、法製備辣根過氧化物酶標記鏈黴親(qin) 和素的共軛（SABC）工作的解決(jue) 方案：
準備在30min，之前的實驗。
1）calculate總卷在工作的解決(jue) 方案：0.1毫升/（×）井的數量。（allow
0.1～0.2毫升以上的總卷）
2）的稀釋SABC用SABC稀釋緩衝(chong) AT 1∶100和thoroughly混音。（即增加1μL，SABC法檢測
激情99μL，SABC法檢測稀釋緩衝(chong) ）。
檢測程序
在增的井，equilibrate SABC法對工作液和底物TMB方法至少30
在小的房間的溫度（37°C）。當diluting樣品和reagents，他們(men) 必須是混合
*和evenly。。。。。。。這是推薦的標準曲線圖A for each試驗。
1。的標準集，測試樣本和控製（零）井的預塗板分別為(wei) ，和
然後，記錄他們(men) 的位置。這是推薦的測量的標準和樣品中的每
重複的。洗板2時代前的綜合標準，抽樣和控製（零）井！！！！！！！
2。aliquot 0.1ml（100ng／ml，50ng／ml，25ng /毫升，12.5ng /毫升，6.25ng /毫升，3.125ng /毫升，1.56ng /毫升，
標準溶液的入井的標準。
3。添加0.1毫升/標準樣品的稀釋緩衝(chong) 的激情控製（零）的話。
4。添加0.1毫升恰當稀疏抽樣（人體(ti) 血清、血漿、組織勻漿和其他
生物流體(ti) 的熱情。）抽樣試驗井。
5。。。。。。。該密封板與(yu) A和incubate覆蓋在37°C為(wei) 90分鍾。
6。remove的封麵上，必須在內(nei) 容和板，洗板和2與(yu) 華盛頓時報的緩衝(chong) 。
不要讓井幹式化外，在任何時間。
7。添加0.1毫升的生物素標記的檢測抗體(ti) 工作液入井（以上的標準，
試驗樣品與(yu) 零井）。添加的溶液，在底部每井無接觸加熱的
側(ce) 壁。
8。該密封板與(yu) A和incubate覆蓋在37°C（60分鍾。
9。remove的封麵，和洗板3時代與(yu) 洗的緩衝(chong) 。
10。添加0.1毫升，SABC法檢測溶液工作熱情，每孔，在蓋板和incubate在37°C的方法
30分鍾。
11。remove的覆蓋和洗板5與(yu) 華盛頓時報的緩衝(chong) ，和每一次讓洗
緩衝(chong) 停留在井的方法1～2分鍾。
12。添加90μL（TMB底物的熱情，每孔，在蓋板和incubate 37°C，在黑暗的.
在15到30分鍾。（注：這incubation時參考使用的方法是隻讀的，優(you) 化的時
應該由用戶端的決(jue) 心。）和shades藍可以在個(ge) 3～4口井
（與(yu) 集中的標準溶液中OAS1），其他井秀好obvious色彩。
13。。。。。。。添加50μL大學停止溶液的熱情和thoroughly每好的混合。激情黃色顏色的變化
立即。
14。讀《absorbance外徑在450 nm的微孔板讀者立即後的增
停止的溶液。

注：如果測量的樣品被稀釋，將稀釋係數乘以濃度。
從(cong) 插值得到稀釋前的濃度。
總結
1。在添加標準、樣品和控製（零）井之前，清洗2次平板！
2。在37°C下向每個(ge) 孔中添加100μl標準或樣品90分鍾。
三。在37°C下每孔加入100μL生物素檢測抗體(ti) 工作液60分鍾。
4。吸洗3次
5。每口井加入100μL SABC工作液。在37°C下培養(yang) 30分鍾
6。吸洗5次
7。添加90μl TMB基板。在37°C下培養(yang) 15-30分鍾
8。加入50μl停止溶液。立即在450牛米處讀取
9。計算結果
典型數據和標準曲線
OAS1酶聯免疫吸附測定試劑盒的典型標準運行結果如下所示。這個(ge) 標準曲線是
在實驗室生成，僅(jin) 供演示。每個(ge) 用戶都應該獲得自己的標準
按實驗曲線。（不適用）

特異性
該方法靈敏度高，對OAS1的檢測有很好的特異性。未觀察到OAS1與(yu) 類似物之間存在明顯的交叉反應或幹擾。
注：受現有技能和知識的限製，我們(men) 無法完成OAS1與(yu) 所有類似物之間的交叉反應檢測，因此交叉反應可能仍然存在。
恢複
下麵列出的基質中加入一定水平的OAS1，回收率為(wei)
通過將測量值與(yu) 樣品中預期的OAS1量進行比較計算。

線性度
通過加入適當濃度的
OA1及其係列稀釋劑。通過計算的百分比來證明結果。
集中到預期

精密度
分析內(nei) 精密度（分析內(nei) 精密度）：低、中、高3個(ge) 樣品
分別在一個(ge) 平板上測試OAS1 20次。
分析間精密度（分析間精密度）：低、中、高3個(ge) 樣品
在3個(ge) 不同的平板上測試OAS1，每個(ge) 平板上重複8次。
cv（%）=sd/平均x100
內(nei) 分析：cv<8%
化驗間：CV<10%
穩定性
酶聯免疫吸附測定試劑盒的穩定性取決(jue) 於(yu) 活性損失率。這個(ge) 工具的損耗率比較低
在適當的儲(chu) 存條件下，在有效期內(nei) 不得超過10%。

為(wei) 了盡量減少對性能、操作程序和實驗室條件的額外影響，
尤其要嚴(yan) 格控製室溫、空氣濕度、培養(yang) 箱溫度。
也強烈建議由同一個(ge) 操作員從(cong)
從(cong) 開始到結束。