kamiyabiomedical KT-470說明書

kamiyabiomedical KT-470說明書(shu)

Mouse Cardiac Troponin-I ELISA

小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯免疫吸附試驗
用於(yu) 小鼠血漿肌鈣蛋白I的定量測定。
貨號 KT-470
僅(jin) 供研究使用

產(chan) 品信息
小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯免疫吸附試驗
貓。KT-470號
產(chan) 品
K-分析小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯免疫吸附試驗是一種酶免疫分析法，用於(yu) 定量測定心肌
小鼠血漿肌鈣蛋白-I。僅(jin) 供研究使用。
介紹
心肌肌鈣蛋白-I（ctni）是調節肌肉收縮的肌鈣蛋白複合物的組成部分。心髒損傷(shang) 後，CTNI
被釋放到血液中。因為(wei) 它在心髒中有特殊的表達，所以它是心髒損傷(shang) 的一個(ge) *的生物標誌物。在
人CTNI水平在受傷(shang) 後12-24小時達到峰值，2-6天內(nei) 恢複到基線水平。在小鼠中，水平早在1
1-3天內(nei) 恢複正常。
原理
本試驗用於(yu) 血漿樣品。酶聯免疫吸附試驗使用兩(liang) 種不同的抗體(ti) ，它們(men) 識別相對
CTNI上的蛋白酶抗性表位。一種用於(yu) 固相固定（微量滴定井）。第二個(ge) 是共軛的
對辣根過氧化物酶（HRP）進行檢測。首先用三體(ti) 積的血漿稀釋血漿樣品。
稀釋劑。然後將校準器和稀釋樣品與(yu) HRP共軛物在微量滴定池中培養(yang) 1小時。這個(ge)
結果CTNI分子夾在固定和檢測抗體(ti) 之間。洗井到
去除未結合的HRP共軛物。加入TMB，孵育20分鍾。如果存在CTNI，則形成藍色。顏色
通過添加停止溶液停止顯影，將顏色變為(wei) 黃色，並在450 nm處測量吸光度。
CTNI的濃度與(yu) 吸光度成正比，由校準曲線得出。
組件
•防CTNI塗層板（12 x 8孔條）
•CTNI庫存校準器（凍幹）
•校準器稀釋劑，25毫升
•血漿稀釋劑，25 ml
•HRP共軛物，11 ml
•20倍洗滌液，50毫升
•TMB溶液，11毫升
•停止溶液，11毫升

所需但未提供的材料
•移液器和吸管頭
•蒸餾水或去離子水
•聚丙烯或玻璃管
•渦流攪拌機
•吸水紙或紙巾
•培養(yang) 皿/搖床
•板墊圈
•能夠測量450 nm吸光度的讀板器。
•曲線擬合軟件
洗滌液準備
洗滌液作為(wei) 20倍的儲(chu) 備提供。使用前，用950毫升蒸餾水稀釋瓶子（50毫升）的內(nei) 容物。
或去離子水。
校準器準備
1。按照小瓶標簽上的詳細說明，用去離子水或蒸餾水重新配製凍幹的CTNI儲(chu) 備。輕輕攪拌直到溶解的
2。將7根聚丙烯管標記為(wei) 10、5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 ng/ml。
三。在標記為(wei) 10 ng/ml的試管中，移液管446.1微升校準稀釋液。然後加入53.9μl的原料，輕輕攪拌。這個(ge)
提供10 ng/ml校準儀(yi) 。
4。用移液管將250微升校準稀釋液移入標有5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 ng/ml的試管中。
5。通過將250μl的10 ng/ml校準器與(yu) 250μl的稀釋劑在管中稀釋和混合，製備5 ng/ml校準器。
標記為(wei) 5 ng/ml。同樣，通過兩(liang) 倍串聯稀釋準備剩餘(yu) 的校準儀(yi) 。
重組後的CTNI儲(chu) 備應在使用後立即冷凍。冷凍時保持穩定或至少1
-20°C時為(wei) 一個(ge) 月，-70°C時為(wei) 6個(ge) 月。使用後丟(diu) 棄工作校準儀(yi) 。
樣品采集與(yu) 製備
血漿（EDTA、檸檬酸鹽或肝素）應在血液采集後盡快製備，並在4°C下保存。
應同樣處理樣品（即所有樣品的儲(chu) 存時間和溫度應相同）。中頻等離子體(ti)
樣品不能在采集後4小時內(nei) 進行分析，應在-70°C下冷凍，使用前僅(jin) 解凍一次。
我們(men) 建議對樣品進行一式兩(liang) 份的分析。分析前，血漿樣品應稀釋四倍
血漿稀釋劑。這可以很容易地通過將100μl的每個(ge) 血漿樣品與(yu) 300μl的血漿稀釋劑混合
聚丙烯微型離心管。
一般說明
1。所有試劑在使用前應達到室溫。
2。解凍後，校準器稀釋劑中可能會(hui) 出現沉澱物。應通過離心法去除沉澱物。
在台式離心機中以約3000轉/分的轉速運行5分鍾。使用幹淨的上清液。
三。在*理解
指導並遵守良好的實驗室慣例。
4。清洗程序至關(guan) 重要。洗滌不足將導致精度差和吸光度讀數錯誤升高。
5。實驗室溫度會(hui) 影響吸光度讀數。我們(men) 的酶聯免疫吸附測定試劑盒是用設置在
150轉/分和25°C。在較低溫度下進行分析會(hui) 導致吸光度值較低。

測定程序
1。將所需數量的8孔條固定在支架中。未使用的板條應存放在重新密封的袋子中
4°C的幹燥劑，以備將來使用。
2。在每個(ge) 孔中添加100μl的HRP共軛物。
三。向井中注入100微升校準儀(yi) 和稀釋樣品（我們(men) 建議校準儀(yi) 和樣品試運行
複製品）。
4。在150轉/分和25°C的搖板機上培養(yang) 1小時。
5。使用平板墊圈（400μl/孔）排空並用1X洗滌液清洗5個(ge) 微量滴度孔。
6。在吸水紙或紙巾上用力敲打油井，清除所有殘留的液滴。
7。向每個(ge) 孔中分配100μl TMB。
8。在150轉/分和25°C的軌道式微型平板振動篩上培養(yang) 20分鍾。
9。20分鍾後，通過向每個(ge) 孔中添加100μl的停止溶液來停止反應。
10。輕輕混合。務必確保所有藍色變為(wei) 黃色。
11。在5分鍾內(nei) 用平板閱讀器讀取450納米的吸光度。
計算結果
1。使用曲線擬合軟件，通過繪製校準器的吸光度值與(yu) 對數10的關(guan) 係來構建校準曲線。
濃度。
2。將校準曲線擬合為(wei) 四參數邏輯回歸（4pl）方程（x軸=log10濃度），並確定
樣品的濃度（導出反對數）。
三。將導出濃度乘以稀釋係數，以確定原始樣品中的實際濃度。
4。如果A450值超出校準曲線，應適當稀釋樣品並重新測試。如果進一步稀釋
需要時，新鮮解凍的血漿樣品應先用三體(ti) 積的血漿稀釋劑（4倍稀釋）稀釋。這個(ge)
然後用校準器稀釋劑稀釋所得混合物。
典型校準曲線
典型的校準曲線如下所示。這隻是為(wei) 了說明。必須為(wei) 每個(ge) 實驗生成校準曲線。

存儲(chu)
將凍幹後的原料儲(chu) 存在-20°C或以下。試劑盒的剩餘(yu) 部分應儲(chu) 存在4°C，微量滴定板應
放在裝有幹燥劑的密封袋中。自購買(mai) 之日起，套件將保持穩定6個(ge) 月。