Quickzyme QZBtotcol1操作方法

Quickzyme QZBtotcol1操作方法

介紹

膠原是細胞外基質的主要成分之一。膠原生成的失調會(hui) 導致纖維化（過多的膠原）或骨關(guan) 節炎（過少的膠原）等病理變化。

因此，在許多情況下，膠原蛋白的測定是很重要的

疾病相關(guan) 研究。

quickzyme總膠原測定是基於(yu) 羥脯氨酸的檢測。羥脯氨酸是一種非蛋白性氨基酸，存在於(yu) 哺乳動物的彈性蛋白和膠原蛋白中。它的存在主要局限於(yu) 膠原的三螺旋，在那裏它的存在增加了三螺旋的穩定性。羥脯氨酸是在脯氨酸羥化酶的作用下由特定的脯氨酸殘基翻譯後形成的。組織水解物中的羥脯氨酸可以直接測量膠原蛋白的含量。

膠原的測定是從(cong) 組織樣品在95oC的6M HCl中*水解開始的。水解產(chan) 物中的羥脯氨酸殘基通過對prockop和udenfriend（anal）所述方法的改進進行定量。Biochem.，1960，1:228-239）。該分析測量了樣品中羥脯氨酸的總量，它代表了樣品中存在的所有類型的膠原，而不區分膠原類型和前膠原、成熟膠原和膠原降解。

產(chan) 品

該測定是簡單的，並且結果在570 nm處具有大的吸光度。這種分析方法的發展使得它不需要酸水解後的幹燥步驟，而酸水解通常需要特殊的設備。

膠原蛋白標準線樣品製備的移液方案

分析程序

建議對所有樣品和標準品進行分析，一式兩(liang) 份

一。按照“樣品製備”中的說明製備樣品。

2.按照“標準製備”中的說明製備膠原蛋白標準品。

三。用移液管將35微升標準溶液移到分析微孔板的適當孔中。

四。用移液管將35μl稀釋的水解未知樣品（在4M HCl中）移到適當的孔中。

5個(ge) 。每孔加入75μl試液，混勻。

6.用一個(ge) 封閉的膠粘板封條蓋住板，在室溫下孵育20分鍾，同時搖動板。

7。通過檢測試劑A和B2:3（RESP 30μL＋45 L L/阱）混合，製備一套足以檢測待測威爾斯（75μL/阱）的試劑。

8。小心地拆下板密封件

9。每口井加入75μl檢測試劑。

10。用封閉的粘合板密封件蓋住板。

11。搖動盤子使之充分混合。在60°C的烘箱中培養(yang) 60分鍾（不要使用更高或更低的溫度）。

12。把盤子放在冰上冷卻5分鍾至室溫

13。混合板並小心地拆下板密封件

14。清潔板底部，在570 nm（可接受540-580 nm）下讀取板並進行數據分析。

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