biochain epoc培養說明

biochain epoc培養(yang) 說明

一、MEPOC生長培養(yang) 基的製備

我們(men) 推薦使用Biochain的MEPOC生長培養(yang) 基（CAT Z7030033）培養(yang) 我們(men) 的MEPC。

一。在室溫水浴中解凍MEPOC生長介質補充劑（CAT Z7030034）。

2.在Mepoc基本培養(yang) 基（CAT Z7030035）的瓶子（500 ml）中加入整個(ge) 體(ti) 積（25 ml）的EPOC生長培養(yang) 基補充劑，製備Mepoc生長培養(yang) 基。生物鏈的mepoc生長培養(yang) 基不含抗生素，但如果擔心汙染，可以在培養(yang) 基中添加抗生素。

三。使用前，在37°C水浴中加熱部分mepoc生長介質。

二。解凍冷凍細胞

一。在37°C水浴中加熱EPOC生長培養(yang) 基。

2.用70%乙醇擦拭冰凍小瓶的外部。在37°C的水浴中快速解凍冷凍細胞。

三。將細胞懸液無菌轉移到15ml試管中。用1毫升生長培養(yang) 基衝(chong) 洗小瓶，並在15毫升試管中與(yu) 細胞混合。以170克（或1400轉/分）的速度離心5分鍾，使細胞沉澱。除去上清液。加入5ml新鮮小鼠epc培養(yang) 基，置於(yu) t25燒瓶中。

四。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yang) 箱中培養(yang) 細胞。每隔一天換一次。健康的培養(yang) 物顯示紡錘體(ti) 形態，培養(yang) 2-3天後細胞數量應加倍。

三、亞(ya) 培養(yang) 細胞

一。當細胞達到100%匯合時進行繼代培養(yang) 。

2.在通過細胞前一天更換培養(yang) 基。

三。在37°C水浴中加熱Dulbecco的PBS、0.05%胰蛋白酶/EDTA和MEPOC生長培養(yang) 基。

四。用Dulbecco的PBS衝(chong) 洗細胞。

5個(ge) 。用胰蛋白酶/EDTA溶液（1.5毫升/25平方厘米）培養(yang) 細胞3-5分鍾，直到大約90%的細胞開始分離。輕輕地填充血管使細胞分離。

6.加入相當於(yu) 胰蛋白酶/EDTA體(ti) 積1/10的胎牛血清中和胰蛋白酶，輕輕搖動培養(yang) 管混合。

7號。輕輕地重新懸浮細胞，並將細胞轉移到15ml錐形管中。

8個(ge) 。在室溫下將細胞懸液在170 x g下離心5分鍾。

9號。小心地去除上清液，不要幹擾細胞顆粒。在生長培養(yang) 基中重新懸浮細胞。

10個(ge) 。將它們(men) 按1:5的比例放入新的培養(yang) 皿中。

11號。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yang) 箱中培養(yang) 細胞。每隔一天換一次。

iv.在充滿mepoc生長培養(yang) 基的t25、t75、t125和t225燒瓶中提供增殖性epoc增殖性epoc。

當燒瓶到達時：

一。從(cong) 燒瓶中倒出大部分培養(yang) 基，並在燒瓶中留適量。

2.在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yang) 箱中培養(yang) 細胞。第二天換成中號，以後每隔一天換一次。健康的培養(yang) 基在培養(yang) 2-3天後，紡錘形細胞形態和細胞數量應加倍。