genebridges K006說明書(shu)

Quick & Easy E.coli Gene Deletion Kit

快速簡便的大腸杆菌基因刪除試劑盒

用於(yu) 快速敲除或修飾大腸杆菌染色體(ti) 上的基因。

特征

• Red / ET的忠實重組
• 快速準確
• 可能有多個淘汰賽
• 方便地去除重組質粒

應用領域

• 該試劑盒旨在在不到一周的時間內敲除或改變大腸杆菌染色體上的基因

大腸杆菌染色體上基因的靶向破壞

1.轉化用表達質粒pRedET轉化將被修飾
的大腸杆菌菌株。

2. Red / ET重組
Red / ET表達是通過添加L-阿拉伯糖和溫度變化來誘導的。含有50 bp同源臂的FRT-PGK-gb2-neo-FRT盒被轉化。Red / ET介導的重組通過插入盒帶破壞了靶基因座。

3.可選：去除選擇標記
Flp介導的切除，僅(jin) 留下一個(ge) FRT部位。（另請參見我們(men) 的FRT選擇盒和Flp表達質粒和菌株）。

描述

Red / ET重組使堿基對可以準確，特異性和忠實的方式交換遺傳(chuan) 信息。試劑盒隨附有FRT側(ce) 翼的卡那黴素抗性標記盒，可用於(yu) 替換大腸杆菌染色體(ti) 上的基因。Red / ET重組可替代大腸杆菌染色體(ti) 上長達30kb的片段。如果需要，使用FRT側(ce) 翼抗性盒替代靶基因可以隨後通過FLP重組酶步驟去除選擇標記。FLP表達質粒可以從(cong) Gene Bridges購買(mai) 。通過重複插入試劑盒附帶的功能盒或與(yu) Gene Bridges提供的其他功能盒組合，可以產(chan) 生多個(ge) 基因敲除。重組過程由於(yu) pRedET表達質粒的優(you) 化設計而受到嚴(yan) 格控製。重組蛋白的基因在誘導型啟動子的控製下，質粒帶有溫度敏感的複製起點，可在重組後方便地去除質粒。

內容

• 兩個Red / ET重組蛋白表達質粒pRedET（tet）和pRedET（amp）。通過用這些質粒轉化，可以使任何大腸杆菌菌株變成Red / ET熟練的。
• FRT位於卡那黴素抗性模板的側麵（FRT-PGK-gb2-neo-FRT），可用於您自己的實驗。
• 替代大腸杆菌染色體上甘露糖轉運蛋白（manX）基因的陽性對照。
• 詳細的協議，質粒，圖譜和序列的描述。