熒光底物

基於(yu) ANSN 的熒光底物
的一般結構圖解了基於(yu) 6-氨基-1-萘磺酰胺 (ANSN) 熒光底物的一般結構。在本化合物家族中，R 1 是三肽，其COOH-末端殘基通常是精氨酸。R2和R3可以是氫、烷基、芳基或環烷基。虛線表示各種絲(si) 氨酸蛋白酶水解的位點。

含有熒光報告基團 6-amino-1-naphthalene-sulfonamide (ANSN) 的底物是用於(yu) 監測各種絲(si) 氨酸蛋白酶的酶活性的有用化合物 (1-12)。在此類化合物中，ANSN 報告基團與(yu) 短的三肽序列相連（在 R1 位置）。肽序列旨在優(you) 化酶和底物之間的相互作用。可以添加到 R2 和 R3 位置的其他成分反映了 P' 亞(ya) 位點位置的變化，並且通常會(hui) 影響底物的動力學參數。作為(wei) 有效底物的化合物在三肽和 ANSN 基團之間水解。一旦從(cong) 肽部分切下，ANSN 基團的相對熒光就會(hui) 增加約 1000 倍。

下頁確定的動力學特性將有助於(yu) 選擇合適的底物。已證明 ANSN 底物對因子 VIIa (1-5,7,9,10,12) 的分析特別有用。盡管單獨的因子 VIIa 的底物水解速率相對較慢，但當組織因子加入分析係統時，幾種化合物（例如化合物 SN-17a）的 kcat 會(hui) 發生很大變化。

使用信息：
基於(yu) ANSN 的底物以 DMSO 中的 10mM 儲(chu) 備溶液形式提供，通常可用於(yu) 分析 400 nM 至低至 50pM 濃度範圍內(nei) 的酶。ANSN 底物通常以 50 到 100 µM 的最終濃度使用，並且可以在大多數生理緩衝(chong) 液（即 TBS、HBS、PBS 等）中稀釋到該最終濃度。反應（熒光的相對變化）可以使用標準熒光計或熒光讀板器進行監測。動力學或終點模式可與(yu) 設置在以下波長（激發=352nm，發射=470nm）的儀(yi) 器一起使用。通過在發射光束中使用 390 至 450 nm 長通截止濾波器，可以最大限度地減少光偽(wei) 影。

下表列出了每種底物的動力學特性，表下方列出了期刊參考文獻列表作為(wei) 使用示例。

DMSO 中的儲(chu) 備底物溶液應在 4°C 或更低的溫度下冷凍儲(chu) 存，並應避光。在這些條件下，化合物將保持穩定超過一年。

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