Bridge It SAM檢測試劑盒介紹

Bridge It SAM檢測試劑盒介紹

Mediomics Bridge It®S-腺苷甲硫氨酸（SAM）熒光分析試劑盒

分析性能

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簡單：混合和測量

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快速：培養(yang) 30分鍾後讀取熒光信號

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靈敏度：分析在0.5µM的靈敏度下限下測量SAM

（即96孔中50 pmol/孔或384孔中20 pmol/孔）

微孔板）

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靈活：在FRET（Bridge It®）和TR-FRET（TR）中都可以進行分析-

FRET Bridge It®）格式

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高信號背景比：Bridge It®分析試劑盒的TR-FRET選項提供了非常高的信號背景比（>30倍），這對於(yu) 高通量篩選和藥物發現非常有用

*Bridge It®S-腺苷甲硫氨酸（SAM）熒光分析試劑盒僅(jin) 用於(yu) 實驗室研究和開發（研發）目的。本產(chan) 品未經政府監管部門批準用於(yu) 人類或動物疾病的診斷或治療、食品監測或實驗室研發以外的任何應用，不得用於(yu) 此類目的。

S-腺苷甲硫氨酸（也稱為(wei) SAM，SAMe或AdoMet）在所有類型生物體(ti) 的甲基化生物過程中起著至關(guan) 重要的作用。在甲基化循環中，SAM充當和蛋白質共價(jia) 修飾中使用的甲基基團的供體(ti) 。SAM水平的可變性與(yu) 衰老過程、許多神經和精神疾病（包括阿爾茨海默病、抑鬱症、HIV相關(guan) 疾病）有關(guan)

神經功能障礙/癡呆、多發性硬化、帕金森病、脊髓變性、癲癇、纖維肌痛、偏頭痛，以及慢性肝功能障礙、動脈硬化和癌症。目前，使用高壓液相色譜法（HPLC）對SAM進行定量。高效液相色譜法耗時、成本高，而且由於(yu) 需要大量有機溶劑，對環境不友好。

所有序列特異性結合蛋白的共同特性是，它們(men) 能夠以高親(qin) 和力和特異性結合到包含*核苷酸序列的雙鏈，即蛋白質的結合位點。Mediomics的新型分析平台設計依賴於(yu) 這一共同特征。包含給定目標結合蛋白的序列特異性結合位點的雙鏈體(ti) 被拆分為(wei) 兩(liang) 個(ge) “半位點"雙鏈體(ti) ，每個(ge) 雙鏈體(ti) 具有短的單鏈上臂。這些單鏈延伸足夠短，因此在缺乏靶蛋白的情況下幾乎不會(hui) 發生自發的r-e結合。

然而，當存在靶蛋白時，其對全長序列的高親(qin) 和力將驅動兩(liang) 個(ge) 半位點雙鏈體(ti) 的重新結合。這種重新關(guan) 聯可以通過合並適當的

熒光探針進入兩(liang) 個(ge) 半位點中的每一個(ge) 。結合蛋白的存在被檢測為(wei) 熒光信號的增加。如下圖所示，這種基本平台設計的簡單變體(ti) 允許結合蛋白（黃色卵形）作為(wei) 其特定配體(ti) 的敏感生物傳(chuan) 感器發揮作用：

真核細胞大約含有3000個(ge) 序列特異性結合蛋白。這些重要的蛋白質在有或沒有特定小分子協同調節器（配體(ti) ）的情況下發揮作用，控製基因組活動的各個(ge) 方麵，包括基因表達、複製和修複。Mediomics正在應用其新型熒光分析平台開發體(ti) 外分析，用於(yu) 快速、靈敏地定量結合蛋白及其小分子配體(ti) 的活性。S-腺苷甲硫氨酸是一種小分子配體(ti) ，與(yu) 甲硫氨酸阻遏蛋白結合並共同調節其活性。

Mediomics Bridge It®SAM熒光分析方法基於(yu) 成熟的熒光測量技術和

利用結合蛋白作為(wei) 生物傳(chuan) 感器的新分析平台設計

對於(yu) 各自的小分子co調節器（配體(ti) ）。序列特異性甲硫氨酸再吸收蛋白對其*的親(qin) 和力

其配體(ti) S腺苷甲硫氨酸的存在大大增加了結合位點。在本試驗中，MetJ共有序列分為(wei) 兩(liang) 部分

大約相等的“半位點"，其中一半片段用熒光素標記，另一半片段用Oyster®645熒光團標記。

試樣中SAM的相對含量會(hui) 影響其含量

MetJ蛋白複合物形成的檢測。當這個(ge) 複雜

形式，它使熒光標記的半位點非常接近，並導致熒光信號發射的可測量變化（增加），可使用微孔板讀取器輕鬆測量（波長設置：

吸收485 nm；發射665 nm）。然後使用SAM標準曲線確定測試樣品中的SAM濃度。

Bridge It®SAM熒光分析方法具有非常理想的性能特征，包括高（>6:1）信號背景比、良好的檢測範圍（~ 0.4μM–100μM）和~ 0.4μM的檢測靈敏度。該檢測水平（~ 0.4μM）有助於(yu) 在大多數感興(xing) 趣的測試樣本（包括生物流體(ti) ）中量化SAM，細胞培養(yang) 和發酵培養(yang) 基，以及組織和細胞提取物。該測定可以修改為(wei) 任何使用SAM作為(wei) 反應物或產(chan) 物的酶反應的測定。

Mediomics分析的平板閱讀器設置

對於(yu) 基於(yu) TR-FRET的分析（TR-FRET Bridge It®和TRF-PINCER®）：

330 nm激勵濾波器（帶寬：80 nm）

665 nm發射濾波器（帶寬：7.5 nm）

620 nm發射濾波器（帶寬：40 nm）

應從(cong) 頂部讀取銘牌。建議的讀取設置為(wei) 每個(ge) 數據點50次測量，收集數據前的延遲時間為(wei) 55μs，數據收集時間為(wei) 1000μs。

對於(yu) 基於(yu) FRET的分析（Bridge It®和FRET-PINCER®）：

485 nm激勵濾波器（帶寬：20 nm）

665 nm發射濾波器（帶寬：34 nm）

540 nm發射濾波器（帶寬：40 nm）

應從(cong) 頂部讀取銘牌。建議讀取設置為(wei) 每個(ge) 數據點50個(ge) 測量值。