​Mediomics Bridge-It ®S-腺苷蛋氨酸說明書

Mediomics Bridge-It ®S-腺苷蛋氨酸說明書(shu)

Bridge-It ® S-Adenosyl Methionine (SAM)

Fluorescence Assay

Bridge-It ®S-腺苷蛋氨酸（SAM）

熒光分析

（96孔微孔板格式）

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Bridge It®S-腺苷蛋氨酸（SAM）熒光檢測試劑盒僅(jin) 用於(yu) 實驗室研究和開發（R&D）。本產(chan) 品未獲得政府監管部門批準用於(yu) 診斷或治療人類或動物疾病、監測食品或實驗室研發以外的任何應用，不得用於(yu) 此類目的。

S-腺苷甲硫氨酸（也稱為(wei) SAM、SAMe或AdoMet）在所有類型生物的甲基化生物過程中起著關(guan) 鍵作用。在甲基化循環中，SAM充當用於(yu) 和蛋白質共價(jia) 修飾的甲基基團的供體(ti) 。SAM水平的變異性與(yu) 衰老過程、許多神經和精神疾病，包括阿爾茨海默病、抑鬱症、HIV相關(guan)

神經功能障礙/癡呆、多發性硬化、帕金森病、脊髓變性、癲癇、纖維肌痛、偏頭痛，以及慢性肝功能障礙、動脈硬化和癌症。目前，使用高壓液相色譜法（HPLC）對SAM進行定量。高效液相色譜法耗時、成本高，而且由於(yu) 需要大量有機溶劑，對環境不友好。

所有序列特異性結合蛋白的共同特性是它們(men) 能夠以高親(qin) 和力和特異性結合到含有核苷酸序列的雙鏈-即蛋白質的結合位點。Mediomics的新型分析平台設計依賴於(yu) 這一共同特征。包含給定靶結合蛋白的序列特異性結合位點的雙鏈體(ti) 被分成兩(liang) 個(ge) “半位點"雙鏈體(ti) ，每個(ge) 雙鏈體(ti) 具有短的單鏈上臂。這些單鏈延伸足夠短，使得在沒有靶蛋白的情況下很少發生自發的重新結合。

然而，當靶蛋白存在時，其對全長序列的高親(qin) 和力將驅動兩(liang) 個(ge) 半位點雙鏈體(ti) 的重新結合。通過將適當的熒光探針結合到兩(liang) 個(ge) 半位點的每一個(ge) 中，可以敏感地檢測這種重新結合。結合蛋白的存在被檢測為(wei) 熒光信號的增加。如下圖所示，該基本平台設計的簡單變化允許結合蛋白（黃色橢圓形）作為(wei) 其特定配體(ti) 的敏感生物傳(chuan) 感器：

真核細胞含有約3000個(ge) 序列特異性結合蛋白。這些重要的蛋白質在有或沒有特定的小分子協同調節因子（配體(ti) ）的情況下起作用，控製基因組活動的所有方麵，包括基因表達、複製、基因表達和基因表達，修複醫學組學正在應用其新的熒光分析平台開發體(ti) 外分析，用於(yu) 快速、靈敏地定量結合蛋白及其小分子配體(ti) 的活性。S-腺苷甲硫氨酸是一種小分子配體(ti) ，與(yu) MetJ甲硫氨酸阻遏蛋白結合並共同調節其活性。

Mediomics Bridge It®SAM熒光分析方法基於(yu) 成熟的熒光測量技術和新的分析平台設計的結合，該平台利用結合蛋白作為(wei) 其各自小分子共調節劑（配體(ti) ）的生物傳(chuan) 感器。序列特異性甲硫氨酸阻遏蛋白對其結合位點的親(qin) 和力在其配體(ti) S-腺苷甲硫氨酸的存在下大大增加。對於(yu) 該測定，MetJ共有序列被分成兩(liang) 個(ge) 大致相等的“半位點"，其中一半片段用熒光素標記，另一半片段用Oyster®645熒光團標記。測試樣品中存在的SAM的相對量將影響測定中-MetJ蛋白複合物形成的量。當這種複合物形成時，它使熒光標記的半位點非常接近，並導致熒光信號發射的可測量變化（增加），可使用微板讀取器（波長設置：

吸收nm；發射665nm）。然後使用SAM標準曲線確定測試樣品中的SAM濃度。

Bridge It®SAM熒光分析方法顯示出非常理想的性能特征，包括高（>6:1）信號與(yu) 背景（S/B）比、良好的檢測範圍（~0.4μM–100μM）以及~0.4微米的檢測靈敏度。該檢測水平（~0.4μM）可用於(yu) 定量大多數感興(xing) 趣的測試樣品中的SAM，包括生物液體(ti) 、細胞培養(yang) 和發酵培養(yang) 基以及組織和細胞提取物。這個(ge) 化驗

可以被修改為(wei) 使用SAM作為(wei) 反應物或產(chan) 物的任何酶反應的測定。

測定試劑盒中包含的試劑量足以使用黑色96孔非結合表麵微孔板進行所示數量的單個(ge) SAM測量。

將SAM測定溶液儲(chu) 存在-80°C下，直至使用，在該溫度下，SAM測定液將保持其活性長達1年。如果-80°C的冷凍櫃不可用，則將SAM測定溶液儲(chu) 存在-20°C，直到使用，在那裏它將保持其活性長達6個(ge) 月。Bridge It®SAM熒光分析試劑盒的剩餘(yu) 部分可在-20ºC下儲(chu) 存在冰箱中，直至需要使用。僅(jin) 解凍適當數量的

計劃實驗所需的試劑管。每管SAM測定溶液包含足以使用96孔黑色微孔板進行十（10）次SAM測量的試劑。

將SAM測定溶液在37℃下解凍30分鍾，並在室溫下保存直至使用。任何未使用的試劑可在4°C的冰箱中密封儲(chu) 存一周。SAM分析試劑盒試劑在-20°C下冷凍保存時，將保持其活性至少2個(ge) 月。