TEFLabs 特約代理

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離子指示標記產(chan) 品：

Calcium Indicators （鈣離子指示產(chan) 品）

Leakage Resistant Indicators （防滲漏離子指示產(chan) 品）

Near Membrane Indicators （近膜離子指示劑）

Low Affinity Indicators （低親(qin) 和力離子指示劑）

Sodium Indicators （鈉離子指示劑）

Potassium Indicators （鉀離子指示劑）

Magnesium Indicators （鎂離子指示劑）

Chloride Indicators （氯化物離子指示劑）

pH Indicators （PH離子指示劑）

Zinc Indicators （鋅離子指示劑）

Ionophores （離子載體(ti) ）

Fluorophores （熒光基團）

pKc Probes （PKC探頭）

Viability and Cytotoxicity Assays

Reagents

Pluronic

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部分產(chan) 品

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   新型熒光試劑柱前衍生液相色譜定量分析小鼠腦脊液中氨基酸類神經遞質生物樣品中的氨基酸測定多采用液相色譜(HPLC)法[31、氣相色譜．質譜聯用法[ ]和毛細管電泳[s]等 柱前衍生HPLC法測定氨基酸的技術具有選擇性高、分析速度快和靈敏度高的優(you) 點．在藥物和臨(lin) 床樣品氨基酸分析中得到廣泛應用『6] 由於(yu) 氨基酸對紫外和可見光的吸收很弱．采用熒光試劑柱前衍生可以生成具有強熒光的衍生物．從(cong) 而實現高靈敏檢測。常見的檢測氨基酸的熒光試劑主要有鄰苯二甲醛(OPA)、3．(4一羧基苯甲酰基)一喹啉一2一羰醛(CBQCA)、熒光素異硫氰酸酯(FITC)、丹磺酰氯(DNS—C1)等．與(yu) 這些熒光試劑相比較．二氟化硼一二吡咯甲烷類熒光試劑具有高的熒光量子產(chan) 率和摩爾吸光係數．光穩定性能良好的優(you) 點[ 。但二氟化硼一二吡咯甲烷的合成過程中由於(yu) 吡咯環的聚合使其產(chan) 率不高本文采用新合成的1，3，5．7一四甲基．8．苯基．[4'-0一(Ⅳ_琥珀酰亞(ya) 胺乙酸酯)]一二氟化硼．二吡咯甲烷(TMPAB—OSu)為(wei) 柱前衍生化試劑．該試劑曾用於(yu) 毛細管整體(ti) 柱微萃取．經富集後檢測視網膜中的興(xing) 奮性氨基酸E8] TMPAB-OSu直接用於(yu) HPLC分離並熒光檢測小鼠腦脊液中5種氨基酸類神經遞質還未見報道 采用TMPAB—OSu檢測腦脊液中痕量的氨基酸．研究顯示該法靈敏度高．重現性好．為(wei) 腦脊液中氨基酸的分析檢測提供了一種新手段1 材料與(yu) 方法1．1 儀(yi) 器液相色譜儀(yi) (Agilentl100．美國Agilent公司)，配置有以下組件：高壓四元泵、在線真空脫氣機、定量進樣六通閥(20 1)、熒光檢測器，由化學工作站軟件控製各組件的運行：Z0rbaxEclipse XDB—C8分析柱(150mmx4．6 mm，5 m，美國Agilent公司)；pH計(Deha320，瑞士梅特勒一托利多公司)。

　　1．2 試劑與(yu) 材料天門冬氨酸(Asp)、穀氨酸(Glu)、穀氨酰胺(Gln)、 ．氨基丁酸(GABA)、丙氨酸(Ala)、硼酸、硼砂、檸檬酸、磷酸氫二鈉、乙腈、甲醇、四氫呋喃及五氧化二磷均為(wei) 分析純．TMPAB—OSu (本實驗室合成，2 mmol／L無水乙腈溶液)；實驗用水為(wei) 二次蒸餾水。小鼠腦脊液實驗方法1-3．1 色譜條件 流動相由甲醇和水溶液配製，進樣前，C 分析柱用流動相平衡30 min，樣品進樣量為(wei) 2O l，流速為(wei) 1．0 ml／min，柱溫為(wei) 室溫，熒光激發及發射波長為(wei) ：入。／ 1=497nm／509 nm。

　　色譜分離氨基酸衍生物采用梯度洗脫模式．洗脫程序按表1進行。其中流動相A：甲醇；B：水：

　　C：O．2 mol／L pH 6．0的檸檬酸一Na2HPO 緩衝(chong) 溶液。

　　表1 色譜梯度條件Tab．1 Chromatographic gradient condition1．3．2 氨基酸標準溶液和緩衝(chong) 溶液的配製 氨基酸的標準溶液均配成1 mmo]／L的水溶液．使用時稀釋至所需濃度H3BO3一Na2B407緩衝(chong) 溶液由O．05 mol／L Na2B407溶液和0．2 mol／L H3BO 溶液混合在酸度計上調至所需pH值。檸檬酸一Na2HPO 緩衝(chong) 溶液由0．1mol／L檸檬酸溶液和0．2 mol／L Na2HPO 溶液混合在酸度計上調至所需pH值1．3．3 TMPAB—osu與(yu) 氨基酸的衍生 取一定量的氨基酸混合溶液於(yu) 1 ml Eppendof管中．加入0．2 ml pH 8．8的H BO ．Na2B40，緩衝(chong) 溶液。再加入20 Ixl TMPAB．OSu乙腈溶液和lOOpd乙腈．稀釋至刻度，搖勻，30℃下衍生5 min。經O．22 m濾膜過濾。在1．3．1的色譜實驗條件下進行檢測。

　　1．3．4 樣品處理小鼠腦脊液0．05 ml與(yu) O．2 ml甲醇混勻．於(yu) 4~C下靜置10 min．在低溫冷凍離心機中4~C以25 155xg離心10 min後．再將上清液保存在一30℃冰箱中。衍生時取出0．1 m1．用水稀釋至1 ml，再從(cong) 中取2O l直接按照1．3．3方法衍生

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