| 點擊次數：227 發布時間：2017/3/2 |
IBA-lifesciences德國IBA GmbH致力於(yu) 向生命科學研究提供高質量的工具。作為(wei) 一個(ge) "TAGnology" 公司，IBA是一個(ge) 合格的學術界研究夥(huo) 伴，是表達克隆和蛋白質純化技術以及蛋白質和核酸遞送技術的zui前沿的供應商之一，其的蛋白質產(chan) 品和服務覆蓋整個(ge) 藥物發現過程。IBAGmbH總部座落於(yu) 德國的哥廷根，它從(cong) 2000年開始在世界範圍的市場營銷其產(chan) 品和服務。Strep-tag是一個(ge) 通用的技術平台，用於(yu) 克隆、表達、一步純化、檢測和分析純的、具有生物學活性的蛋白質。在雙標簽蛋白質中，作為(wei) Strep-tag的*夥(huo) 伴，IBA還提供6 xHistidine-tag 用以對全長表達進行快速控製，並且由於(yu) 采用這兩(liang) 種獨立的純化方法而增加蛋白質純度。新技術MATra ("Magnet Assisted Transfection") 可以有效轉染大範圍的細胞係。MALipofection Enhancer與(yu) 新的脂質體(ti) 轉染試劑IBAfect的組合是一個(ge) 的“磁力輔助的脂質體(ti) 轉染”組合。Streptamer技術是功能性T細胞分離的一個(ge) 突破，它是一種對抗原特異T細胞進行功能性分離和鑒定的新方法。IBA開發的Twin-Strep-Tag係統用於(yu) 離析多蛋白質複合體(ti) 以及鑒定蛋白質-蛋白質相互作用。2007年底，IBA隆重推出了組合式克隆的新產(chan) 品StarGate，用以係統地將任何目的基因轉入大腸杆菌、酵母、哺乳動物等背景細胞，高速和方便地篩選優(you) 化的宿主/標簽組合。
Strep-tag® / Strep-Tactin®蛋白質表達與(yu) 純化係統 作為(wei) 後基因組時代表達克隆和蛋白質純化技術zui重要的供應商之一，德國IBA公司開發了一個(ge) 稱為(wei) Strep-tag的通用技術平台。這種快速、合算、多樣性地生產(chan) 和使用重組蛋白的技術平台是IBA與(yu) TU Munich的Arne Skerra博士教授密切合作開發而成。除了圍繞Strep-tag的大型產(chan) 品組合外，IBA還*提供應用該技術的蛋白質生產(chan) 定製服務。 Strep-tag技術開發的原理是*的生物素（biotin）和抗生物素蛋白鏈菌素（streptavidin）之間的結合反應。為(wei) 了將這種牢固的相互作用用於(yu) 蛋白質純化用途，研究者們(men) 發現需要一個(ge) 肽，該肽與(yu) 重組蛋白質融合後，能夠結合在streptavidin的生物素結合口袋，從(cong) 而作為(wei) 純化tag。zui後研究者們(men) 成功設計出一個(ge) 隻由8個(ge) 氨基酸(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)構成的短序列並稱之為(wei) Strep-tag II。為(wei) 了優(you) 化結合屬性，streptavidin也被設計成為(wei) Strep-Tactin。如此，一對優(you) 化的結合夥(huo) 伴被發現了：Strep-tag / Strep-Tactin係統現已成為(wei) zui被廣泛應用的親(qin) 和層析係統之一。 Strep-Tactin與(yu) 多種不同的基質偶聯，使Strep-tag融合蛋白得以在生理條件下親(qin) 和純化。與(yu) 其他tag相比，這些溫和的純化參數能保存蛋白質的生物活性，並僅(jin) 經一步層析後即可產(chan) 出超過99%的純度。 Strep-Tactin: Engineered streptavidin for optimal binding of a short peptide called “Strep-tag” Strep-tag®係統可用於(yu) 從(cong) 任何表達係統包括杆狀病毒、哺乳動物細胞、酵母和細菌中純化Strep-tag II蛋白。用於(yu) 細菌、哺乳動物細胞和酵母的表達載體(ti) 請參見本欄目相關(guan) 章節。 除了表達載體(ti) ，IBA還提供圍繞Strep-tag用於(yu) 蛋白質純化、檢測、分析（蛋白質固定）、蛋白質：蛋白質相互作用研究以及高通量純化的完整的產(chan) 品組合。 The tag技術蛋白質僅(jin) 8個(ge) 氨基酸平衡的氨基酸組成 – 對蛋白質的結構和活性一般沒有影響高選擇性和易於(yu) 控製的結合屬性 C-或N-末端融合無需去除有效和通用的表達載體(ti) ，標準化的克隆策略生理條件下的親(qin) 和層析通過顏色改變可見柱再生和活性狀態（見下）可獲得超過99%的純度Strep-tag適用於(yu) ：金屬蛋白膜蛋白具有多個(ge) 亞(ya) 單位的敏感蛋白質複合體(ti) 以及其他任何蛋白質
結合： GFP Strep-tag 蛋白結合於(yu) Strep-Tactin洗脫： 用脫硫生物素再生（顏色控製）： 開始去除脫硫生物素再生： 脫硫生物素被*除去再生： 用平衡緩衝(chong) 液快速再生 純化在E. coli 中過度表達的GFP-Strep-tag II 融合蛋白 圖片(從(cong) 左至右)：1、GFP-Strep-tag II融合蛋白特異結合在Strep-Tactin SepharoseÒ柱上，而非特異性蛋白質被少量生理性洗滌緩衝(chong) 液迅速洗去。2、由於(yu) 加入特異性競爭(zheng) 劑脫硫生物素，Strep-tag蛋白被洗脫。3-5、柱再生：脫硫生物素被黃色溶液HABA取代，後者一旦與(yu) Strep-Tactin複合即變為(wei) 紅色。HABA隨後被洗滌緩衝(chong) 液除去，柱子可被重新使用。 怎樣獲得優(you) 良無比的純化因素 Strep-tag® 純化係統是基於(yu) Strep-tag II肽和特殊設計的Strep-Tactin（streptavidin的變體(ti) ）之間高選擇性和極易控製的相互作用而建立起來的蛋白純化係統。Strep-tag II對Strep-Tactin的結合親(qin) 和力比對streptavidin高將近100倍。在親(qin) 和純化過程中，附了tag的蛋白質結合在被固定了的Strep-Tactin上。生理緩衝(chong) 液如PBS可與(yu) 一係列添加劑一起用於(yu) 該純化過程。短暫的洗滌步驟之後，在同一緩衝(chong) 液中加入脫硫生物素（2.5 mM）即可將純化的重組蛋白溫和地洗脫下來。脫硫生物素是一種便宜的、可逆結合的、穩定的生物素類似物，而生物素是streptavidin的天然配體(ti) 。這種競爭(zheng) 性洗脫是賦予特異性的第二步，從(cong) 而得到優(you) 良無比的純化因素。該係統安全、易於(yu) 使用；純化柱再生和活性狀態可以通過純化柱上的顏色改變來觀察到。 Strep-tag融合蛋白可以經Western blots, ELISA, 電子或熒光顯微鏡進行方便的檢測。有相應的Strep-Tactin酶共軛物和抗Strep-tag II的單克隆抗體(ti) 供出售。 Strep-tag®II對蛋白質的影響可以忽略 此8個(ge) 氨基酸的短肽tag由於(yu) 具有化學平衡的氨基酸組成（WSHPQFEK），因此對重組蛋白的影響可以忽略不計。該tag可以被置於(yu) C-端或N-端。建議在蛋白和tag之間加入2個(ge) 氨基酸的間隔以確保tag的可接近性。總的來說，該tag不幹擾蛋白質的折疊或生物活性、不與(yu) 重金屬離子緩衝(chong) 液雜質反應、無離子交換屬性、不會(hui) 誘導蛋白質聚集。因此無需去除該tag。 Strep-Tactin®：長效的親(qin) 和柱 Strep-Tactin是streptavidin的一種衍生物，是已知zui穩定的蛋白質之一。Streptavidin對以8 M urea或guanidine, 0.5 M NaOH以及50 % formamide (t = 1 h; T = 37 °C)的處理保持穩定。蛋白酶(胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶和彈性蛋白酶等) 在1:50 w/w比例下，37 °C孵育2小時都無法切割 streptavidin。當SDS存在時，僅(jin) 在溫度高於(yu) 60 °C時，streptavidin才開始降解成單體(ti) 。經過測試，Strep-Tactin已經被證實具有上述作為(wei) 長效親(qin) 和柱*的特性，可被重複使用3-5次。而且，Strep-Tactin的中性PI值使非特異性蛋白質或核酸的結合降到zui低。 Strep-Tactin樹脂技術指標 有5種版本Strep-Tactin樹脂，區別在於(yu) 其特性和應用。Strep-TactinSepharose®優(you) 先用於(yu) 重力流層析；Strep-TactinSuperflow®和Strep-TactinMacroPrep®也可用於(yu) 低壓力或FPLC；Strep-TactinPOROS®(20和50)用於(yu) FPLC和HPLC層析。每個(ge) 基質都會(hui) 表現出不同的非特異性結合性質，當使用某種基質由於(yu) 非特異性背景而無法獲得滿意結果時，建議換用其它的基質（亦請見Strep-TactinColumnEvaluationSets）。此外Superflow尤其適用於(yu) 增加的流速，也適用於(yu) 大的蛋白質複合物的純化。 試劑濃度Reduction AgentsDTT50 mMβ-mercaptoethanol50 mMNon-Ionic DetergentsC8E4 Octyltetraoxyethylenezui高0.88 %C10E5; Decylpentaoxyethylene0.12 %C10 E60.03 %C12 E80.005 %C12E9; Dodecyl nonaoxyethylene (Thesit)0.023 %DM; Decyl-β-D-maltoside0.35 %LM; N-dodecyl β-D-maltoside0.007 %NG; N-nonyl-β-D-glucopyranoside0.2 %OG; N-octyl-β-D-glucopyranoside2.34 %TX; Triton X-1002 %Tween 202 %Ionic DetergentsN-lauryl-sarcosine2 %8-HESO;N-octyl-2-hydroxy-ethylsulfoxide1,32 %SDS; Sodium-N-dodecyl sulfate0.1 %Zwitter-Ionic DetergentsCHAPS0.1 %DDAO; N-decyl-N,N-dimethylamine-N-oxide0.034 %LDAO; N-dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide0.13 %其它Ammonium sulfate (NH4)2SO42 MCaCl2zui高1 MEtha0%EDTA50 mMGuanidinezui高1 MGlycerolzui高25 %Imidazolezui高250 mMMgCl21 MNaCl5 MUreazui高1 M 注意：這些試劑在高達上述濃度下已成功用於(yu) 純化如GAPDH-Strep-tagÒ。未標注“zui高”的試劑，也許可以使用更高濃度。由於(yu) 結合依賴於(yu) Strep-tag在特殊蛋白質中的空間可及性，所給的濃度值對於(yu) 其他蛋白質可能有偏差。 Strep-Tactin®Sepharose® Strep-Tactin Sepharose提供高結合容量和zui低的非特異結合（見下圖），可用於(yu) 重力流純化。由於(yu) Strep-Tactin樹脂經過優(you) 化適於(yu) 柱親(qin) 和層析，而不適於(yu) 批量純化，因此推薦使用預裝的Strep-Tactin Sepharose柱。該純化柱有多種形式，從(cong) 0.2 ml迷你柱到10 ml柱。 Strep-Tactin Sepharose樹脂技術指標： Strep-Tactin濃度：5 mg/ml 沉積樹脂結合容量：1 ml沉積樹脂可一步法純化50-100 nmol 重組蛋白(多達3 mg 30 KDa蛋白質)支持介質：Sepharose 4FF, 4 % agarose珠子大小45 - 165 µm線性流動速率：重力流排阻極限：3 x 107 Da形式：50 % 懸浮在100 mM Tris/HCl pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl穩定性：室溫運輸後能保存至少6個(ge) 月保存：4 °C，不能凍存運輸：室溫 相關(guan) 產(chan) 品： 目錄號產(chan) 品說明規格供應商2-1202-550重力流Strep-Tactin Sepharose迷你柱（0.2 ml柱床體(ti) 積）5 柱IBA2-1202-001重力流Strep-Tactin Sepharose柱（1 ml柱床體(ti) 積）1 柱IBA2-1202-0505 柱IBA2-1202-051重力流Strep-Tactin Sepharose柱（5 ml柱床體(ti) 積）1 柱IBA2-1202-101重力流Strep-Tactin Sepharose柱（10 ml柱床體(ti) 積）1 柱IBA2-1201-002Strep-Tactin Sepharose (50 %懸浮)4 mlIBA2-1201-01020 mlIBA2-1201-02550 mlIBA2-1201-100200 mlIBA2-1201-5001000 mlIBA Strep-Tactin® Superflow® Strep-TactinSuperflow具有*的機械穩定性、的流動特性以及高動態結合容量，可以用於(yu) 重力流和FPLC，適用於(yu) 增加的流動速率及純化大的蛋白複合物（見下圖特殊用途）。 結合容量：1 ml沉積樹脂（對應於(yu) 2 ml 50 % 懸浮液）可用以一步純化50-100 nmol重組蛋白（高達3 mg 30 kDa蛋白質）支持介質：Superflow 6 (6 % agarose，交聯)珠子大小：60-160 µm，球形線性流動速率：推薦100-300 cm/h用於(yu) 純化Strep-tag蛋白形式(bulk)50 % 懸浮在100 mM Tris/HCl pH 8.0, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA穩定性：室溫運輸後可以保存6個(ge) 月保存：4°C，不能凍存運輸：室溫 相關(guan) 產(chan) 品： 目錄號產(chan) 品說明規格供應商2-1207-550重力流Strep-Tactin Superflow迷你柱（0.2 ml柱床體(ti) 積）5 柱IBA2-1207-001重力流Strep-Tactin Superflow柱（1 ml柱床體(ti) 積）1柱IBA2-1207-0505 柱IBA2-1207-051重力流Strep-Tactin Superflow柱（5 ml柱床體(ti) 積）1柱IBA2-1207-101重力流Strep-Tactin Superflow柱（10 ml柱床體(ti) 積）1柱IBA2-1211-001Strep-Tactin Superflow cartridge（1 ml柱床體(ti) 積）1 cartridgeIBA2-1211-050Strep-Tactin Superflow cartridge（1 ml柱床體(ti) 積）5 cartridgesIBA2-1212-001Strep-Tactin Superflow cartridge（5 ml柱床體(ti) 積）1 cartridgeIBA2-1212-050Strep-Tactin Superflow cartridge（5 ml柱床體(ti) 積）5 cartridgesIBA2-1206-002Strep-Tactin Superflow (50 % suspension)4 mlIBA2-1206-01020 mlIBA2-1206-02550 mlIBA2-1206-100200 mlIBA2-1206-5001000 mlIBA Strep-Tactin® MacroPrep® Strep-Tactin MacroPrep適合所有低壓力層析應用。MacroPrep樹脂展現與(yu) Sepharose®或Superflow®不同的非特異結合性質，因此當采用Sepharose®或Superflow®無法獲得優(you) 化結果時，推薦使用MacroPrep樹脂，反之亦然（見下圖）。由於(yu) Strep-tag純化係統是為(wei) 柱親(qin) 和層析而非批量純化而設計，因此推薦使用我們(men) 預裝的Strep-Tactin MacroPrep裝置用於(yu) 柱層析。 重力流柱具有多種規格，柱床體(ti) 積分別為(wei) 0.2 ml、1 ml、5 ml和10 ml，使用時無需任何進一步的特殊設備。Strep-Tactin MacroPrepcartridges是預填裝的即用型層析柱，可以方便地與(yu) 注射器、蠕動泵層析係統或FPLC / HPLC工作站一起使用，以在低壓力條件下快速、全自動的純化Strep-tag融合蛋白。 Strep-Tactin MacroPrep cartridges有1 ml和5 ml並且可以串聯以擴大吸附容量。IBA也供應螺紋入口和出口的接頭。1 ml Strep-Tactin MacroPrepcartridges的平均吸附容量是每次50-100 nmol重組Strep-tag融合蛋白，推薦的流動速率為(wei) 1 ml / minute (大約相當於(yu) 使用注射器時每分鍾20滴)。 Strep-Tactin MacroPrep樹脂技術指標： 結合容量：1 ml沉積樹脂(相當於(yu) 2 ml 50 % 的懸浮液) 可用於(yu) 一步純化50-100 nmol重組蛋白支持介質：MacroPrep® 50 (polymethacrylate)珠子大小：50 µm線性流動速率：高達300 cm/h可用於(yu) Strep-tag純化形式(bulk)：50 % suspension in 100 mM Tris/HCl pH 8.0, 1mM EDTA, 150 mM NaCl穩定性：運輸後可以保存6個(ge) 月保存：4 °C，不能凍存運輸：室溫 相關(guan) 產(chan) 品： 目錄號產(chan) 品說明規格供應商2-1506-550重力流Strep-Tactin MacroPrep迷你柱（0.2 ml柱床體(ti) 積）5 柱IBA2-1506-001重力流Strep-Tactin MacroPrep柱（1 ml柱床體(ti) 積）1柱IBA2-1506-0505柱IBA2-1506-051重力流Strep-Tactin MacroPrep柱（5 ml柱床體(ti) 積）1柱IBA2-1506-101重力流Strep-Tactin MacroPrep柱（10 ml柱床體(ti) 積）1柱IBA2-1511-001Strep-Tactin MacroPrep Cartridge（1 ml柱床體(ti) 積）1 cartridgeIBA2-1511-0505 cartridgesIBA2-1512-001Strep-Tactin MacroPrep Cartridge（5 ml柱床體(ti) 積）1 cartridgeIBA2-1512-0505 cartridgesIBA2-1505-002Strep-Tactin MacroPrep (50 %懸浮)4 mlIBA2-1505-01020 mlIBA2-1505-02550 mlIBA2-1505-100200 mlIBA2-1505-5001000 mlIBA Strep-Tactin® POROS® Strep-Tactin POROS優(you) 化組合了高流動速率、高選擇性結合和高動態容量（見下圖），可用於(yu) FPLC或HPLC以快速純化Strep-tag蛋白。Strep-Tactin POROS 20的珠子大小為(wei) 20 µm，而POROS 50的珠子大小為(wei) 50 µm，但其結合容量相同。由於(yu) Strep-Tactin樹脂經過優(you) 化適合柱親(qin) 和純化，而不適於(yu) 批量純化，因此推薦使用預裝的1.7 ml的Strep-Tactin POROS柱用於(yu) FPLC和HPLC。請注意：POROS 的結合容量隻有Strep-Tactin Sepharose、Superflow和MacroPrep的一半左右；POROS不被推薦用於(yu) 膜蛋白純化。 Strep-Tactin POROS樹脂技術指標： 結合容量：1.7 ml柱可用於(yu) 一步法純化40-80 nmol重組蛋白支持介質：POROS 20或POROS 50珠子大小20 µm或50 µm線性流動速率：300 - 500 cm/h可用於(yu) Strep-tag純化形式 (bulk)50 % 懸浮在100 mM Tris/HCl pH 8.0, 1mM EDTA, 150 mM NaCl穩定性：運輸後至少6個(ge) 月保存：4 °C，不能凍存運輸：室溫 相關(guan) 產(chan) 品： 目錄號產(chan) 品說明規格供應商2-1203-017即用型Strep-Tactin POROS 20柱（1.7 ml柱床體(ti) 積）1 柱IBA2-1205-017即用型Strep-Tactin POROS 50柱（1.7 ml柱床體(ti) 積）1 柱IBA2-1203-001Strep-Tactin POROS 20 (50 %懸浮)2 mlIBA2-1203-0024 mlIBA2-1203-00510 mlIBA2-1203-01020 mlIBA2-1205-001Strep-Tactin POROS 50 (50%懸浮)2 mlIBA2-1205-0024 mlIBA2-1205-00510 mlIBA2-1205-01020 mlIBA Strep-Tactinâ 離心柱（Spin Columns）——用於(yu) 快速平行純化Strep-tagâ蛋白 l 10分鍾之內(nei) 純化多達150 ug Strep-tag蛋白 l 即用型離心柱 l 快速平行處理多個(ge) 樣本 l 非常合算 為(wei) 了快速、易於(yu) 操作的蛋白質平行純化，IBA提供多用途的Strep-Tactin 離心柱以填補Strep-Tactin重力流柱與(yu) 以96孔形式高通量純化的Strep-Well HT純化微孔板之間的空缺。 Strep-Tactin 離心柱技術指標 產(chan) 品說明：即用型帶有固定好的Strep-Tactin的離心柱，用於(yu) 從(cong) 小規模表達培養(yang) 物中快速純化Strep-tag蛋白形式（柱）：50個(ge) 預填裝離心柱和接收管。用前需以Buffer W (100 mM Tris / HCl pH8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl) 將離心柱重新水化和激活。結合容量：多達150 ug Strep-tag II融合蛋白穩定性：運輸後6個(ge) 月貯存：4°C運輸：室溫 相關(guan) 產(chan) 品 目錄號產(chan) 品名稱規格供應商2-1800-000Strep-Tactin Spin Column kit1 kitIBA2-1850-050Strep-Tactin Spin Columns50 columnsIBA Strep-Tactin Spin Column kit包含50個(ge) spin柱，收集管，洗滌緩衝(chong) 液，洗脫緩衝(chong) 液和對照質粒。 表達載體(ti) Tet和T7表達係統 Tet表達係統 特點和優(you) 點： 以pASK-IBA載體(ti) 在大腸杆菌中高水平表達 由於(yu) tet啟動子而使表達受到緊密調控 增加細胞毒性基因的穩定性 通用的克隆策略，隻需一個(ge) 限製性內(nei) 切酶 N-端或C-端Strep-tag II融合 N-端或C-端6xHistidine-tag融合 Strep-tag II/6xHistidine-tag雙標記載體(ti) 胞液或外周胞質中表達 無水四環素（anhydrotetracycline，AHT）誘導表達 氨卞青黴素或氯黴素抗性 原理和特性： pASK-IBA載體(ti) 與(yu) 受緊密調控的tet啟動子一起工作。tet抑製子在pASK-IBA質粒上編碼，並分別從(cong) beta-內(nei) 酰胺酶啟動子或氯黴素乙酰基轉移酶啟動子組成型表達。這種特殊的安排保證了抑製分子和質粒拷貝數之間平衡的化學計量。在低濃度無水四環素的有效化學誘導下，外源基因表達受到的嚴(yan) 格抑製才得以解除。與(yu) lac啟動子（有漏洞、易受分解代謝產(chan) 物（cAMP水平，代謝狀態）的抑製以及受染色體(ti) 編碼的抑製分子的影響）相比，tetA啟動子/操縱子受到緊密調控，不與(yu) 任何細胞調節機製或遺傳(chuan) 背景有功能上的偶聯。 因此，無需特殊大腸杆菌菌株或額外質粒，多種培養(yang) 基和培養(yang) 條件下都可以應用。例如，葡萄糖基礎培養(yang) 基甚至XL 1-Blue菌株（攜帶四環素抗性基因的一個(ge) 附加拷貝），也可用於(yu) 表達。pASK-IBA表達係統在發酵等多種條件下非常穩定，操作方便。 細胞質pASK-IBA載體(ti) 現以“plus”版本提供。這種新版本包含改良的翻譯起始位點以增加一級蛋白質產(chan) 量，而“plus”載體(ti) （如pASK-IBA3plus）的其餘(yu) 序列與(yu) 其“非plus”前體(ti) （如pASK-IBA3）相同。“非plus”版載體(ti) 從(cong) 現在開始僅(jin) 按需供應。 載體(ti) 的更多元件包括一個(ge) 前後串聯的核糖體(ti) 結合位點（RBS），保證翻譯的有效起始；脂蛋白基因的強終止子，以避免通讀；噬菌體(ti) f1的基因間區域，以提供一種製備單鏈的方法；以及一個(ge) beta-內(nei) 酰胺酶或氯黴素乙酰基轉移酶基因*。這些載體(ti) 均不介導抗四環素抗性。 *使用帶beta-內(nei) 酰胺酶抗性基因的克隆載體(ti) 可能會(hui) 有某些局限性，因為(wei) 氨苄青黴素在細菌培養(yang) 基裏降解的相當快。因此，我們(men) 現在以氯黴素抗性取代氨苄青黴素抗性供應Strep-tag II載體(ti) pASK-IBA2C至pASK-IBA7C。 參考文獻: 以pPR-IBA載體(ti) 通過噬菌體(ti) T7啟動子高水平表達 在BL21菌株中，在T7 RNA polymerase作用下高水平轉錄 無毒蛋白高水平表達 IPTG誘導 N-端或C-端導入Strep-tag II標簽 適合體(ti) 外轉錄和翻譯 原理和特性： Tet啟動子具有中等強度，可以導致某些蛋白質的高水平表達（取決(jue) 於(yu) 如折疊速度和穩定性等難以預測的特性）。但是有些蛋白質隻有經強啟動子的轉錄才能高水平表達。在這些情況下我們(men) 推薦使用T7啟動子。 T7表達係統在pPR-IBA載體(ti) 上編碼，該係統采用T7啟動子和T7 RNA聚合酶以使目標基因高水平轉錄。目標基因的表達受到宿主細胞中T7 RNA 聚合酶的誘導。這一點可以通過使用大腸杆菌BL21來實現。E. coli BL21染色體(ti) 上含有T7 RNA 聚合酶基因，該基因受lacUV5啟動子控製；而該啟動子受IPTG誘導。 查詢多克隆位點請瀏覽https://www.iba-biotagnology。。ｃｏｍ/naps/naps_fr01_02.html 載體(ti) 序列可從(cong) www.iba-biotagnology。。ｃｏｍ/download.html 下載 用於(yu) 在大腸杆菌中表達的載體(ti) Strep-tagÒ 載體(ti) 概覽： IBA提供多種用於(yu) 在大腸杆菌中表達的pASK-IBA載體(ti) 以便攜帶有Strep-tag的重組蛋白表達。除了抗生素抗性基因（AmpR, CamR），pASK-IBA載體(ti) 僅(jin) 在XbaI和HindIII限製性酶切位點之間有區別。其區別如下圖所示：您可以在N-或C-端標簽之間、細胞質外周表達或細胞質表達之間和/或用以去除標簽的內(nei) 蛋白酶切割位點（Factor Xa, enterokinase, thrombin 和 TEV protease）之間作選擇。請注意，通常無須去除標簽。 雙標簽和6xHistidine-tag載體(ti) 概覽： 除了Strep-tagÒ 載體(ti) ，IBA還提供帶有Strep-tag和6xHistidine-tag的雙標簽載體(ti) 以及6xHistidine-tag載體(ti) 。一個(ge) 蛋白質上的兩(liang) 個(ge) 不同標簽能產(chan) 生zui高的純化因素，使得可以在變性或生理條件下純化全長蛋白質。而且，直接從(cong) 培養(yang) 基開始的純化操作可以被優(you) 化。 載體(ti) 僅(jin) 在XbaI和HindIII限製性酶切位點之間有區別。 哺乳動物表達載體(ti) IBA的pEXPR-IBA載體(ti) 是專(zhuan) 為(wei) 哺乳動物細胞中高水平表達和純化重組Strep-tagÒ和/或 6xHistidine-tag融合蛋白而設計的。這些載體(ti) 的克隆策略相同，因而與(yu) 相應的細菌pASK-IBA質粒相兼容。因此，一個(ge) PCR片段可以被平行克隆進pASK-IBA及其相等的pEXPR-IBA。人巨細胞病毒(CMV)立早啟動子在很多哺乳動物細胞中提供強表達。為(wei) 了延長在轉染細胞中表達的時間，載體(ti) 會(hui) 在潛伏感染了SV40大T-抗原（如COS7）的細胞係中複製。此外，新黴素抗性基因可以允許直接篩選穩定的細胞係。 pEXPR-IBA 特點益處Strep-tag II采用Strep-Tactin基質純化重組蛋白CMV 立早啟動子/增強子在多種哺乳動物細胞中高水平表達多克隆位點插入目標基因並與(yu) Strep-tag和/或6xHistidine-tag融合。與(yu) pASK-IBA載體(ti) 兼容新黴素抗性基因在哺乳動物細胞中篩選穩定的轉染子氨卞青黴素抗性基因在E. coli中篩選pUC複製起始位點在E. coli中高拷貝複製BM40 (僅(jin) 見於(yu) pEXPR-IBA42 和44 )使蛋白質分泌進培養(yang) 基中Factor Xa, thrombin (thb), enterokinase (ent) ,TEV protease (TEV)切割位點如果需要可以除去Strep-tag（一般不需要） 用於(yu) 在酵母中表達的載體(ti) IBA現供應兩(liang) 種帶有Strep-tagÒ和瑞士Dualsystems Biotech AG（www.dualsystmes。。ｃｏｍ）的HA epitope-tag的酵母載體(ti) 。 特點： l 高水平、可誘導的表達 l 無需加入用於(yu) 誘導的試劑或改變培養(yang) 基 l 誘導受緊密調控使表達毒性蛋白質 載體(ti) pKS1-ST和pKS2-ST組合了蛋白質表達的兩(liang) 個(ge) 重要特點： l 可誘導的ADH2啟動子：ADH2啟動子受培養(yang) 基中葡萄糖缺失的誘導。在早期生長過程中，葡萄糖充裕，啟動子無活性，因此防止對酵母生長的負效應。當細胞到達靜止早期時，葡萄糖被培養(yang) 基耗盡，ADH2啟動子被誘導，產(chan) 生大量蛋白質。 l KanMX表達框：不象其他酵母表達載體(ti) ，pKS-ST載體(ti) *一個(ge) KanMX表達框，使得可以在豐(feng) 富培養(yang) 基中以G418篩選。豐(feng) 富培養(yang) 基如YPD的使用將顯著增強細胞密度和蛋白質產(chan) 量。 比較所有Strep-tagÒ, 6´Histidine-tag及double-tag載體(ti) 質粒Strep-tag6xHis -tagHA epitope-tag分泌Tag去除蛋白酶抗性目錄號大腸杆菌載體(ti) :具有tet啟動子用於(yu) 胞質外周表達pASK-IBA2C-端--YesNo-Amp2-1301-000pASK-IBA4N-端--YesNo-Amp2-1303-000pASK-IBA6N-端--YesYesfactor XaAmp2-1305-000pASK-IBA12N-端--YesYesthrombinAmp2-1311-000pASK-IBA14N-端--YesYesenterokinaseAmp2-1313-000pASK-IBA32-C-端-YesNo-Amp2-1332-000pASK-IBA44N-端C-端-YesNo-Amp2-1344-000大腸杆菌載體(ti) :具有tet啟動子用於(yu) 細胞質表達pASK-IBA3plusC-端--NoNo-Amp2-1402-000pASK-IBA5plusN-端--NoNo-Amp2-1404-000pASK-IBA7plusN-端--NoYesfactor XaAmp2-1406-000pASK-IBA13plusN-端--NoYesthrombinAmp2-1412-000pASK-IBA15plusN-端--NoYesenterokinaseAmp2-1414-000pASK-IBA17plusN-端--NoYesTEV proteaseAmp2-1416-000pASK-IBA33plus-C-端-NoNo-Amp2-1433-000pASK-IBA35plus-N-端-NoNo-Amp2-1435-000pASK-IBA37plus-N-端-NoYesfactor XaAmp2-1437-000pASK-IBA43plusC-端N-端-NoNo-Amp2-1443-000pASK-IBA45plusN-端C-端-NoNo-Amp2-1445-000pASK-IBA63a-plusC-端--NoNo-Amp2-1463-100pASK-IBA63b-plusC-端--NoNo-Amp2-1463-200pASK-IBA63c-plusC-端--NoNo-Amp2-1463-300pASK-IBA65b-plusN-端--NoNo-Amp2-1465-200大腸杆菌載體(ti) :具有tet啟動子和氯黴素抗性（CAT）pASK-IBA2CC-端--YesNo-CAT2-1321-000pASK-IBA3CC-端--NoNo-CAT2-1322-000pASK-IBA4CN-端--YesNo-CAT2-1323-000pASK-IBA5CN-端--NoNo-CAT2-1324-000pASK-IBA6CN-端--YesYesfactor XaCAT2-1325-000pASK-IBA7CN-端--NoYesfactor XaCAT2-1326-000大腸杆菌載體(ti) :具有T7啟動子pPR-IBA1C-端--NoNo-Amp2-1390-000pPR-IBA2N-端--NoNo-Amp2-1391-000哺乳動物載體(ti) ：具有人CMV啟動子pEXPR-IBA3C-端-NoNo-Amp/Neo2-1903-000pEXPR-IBA5N-端-NoNo,-Amp/Neo2-1905-000pE, XPR,, , ,, -I, B, A7<, /DIV>N-端-NoYesfactor XaAmp/Neo2-1907-000pEXPR-IBA13N-端-NoYesthrombinAmp/Neo2-1913-000pEXPR-IBA15N-端-NoYesenterokinaseAmp/Neo2-1915-000pEXPR-IBA17N-端-NoYesTEV proteaseAmp/Neo2-1917-000pEXPR-IBA42C-端N-端-YesNo-Amp/Neo2-1942-000pEXPR-IBA43C-端N-端-NoNo-Amp/Neo2-1943-000pEXPR-IBA44N-端C-端-YesNo-Amp/Neo2-1944-000pEXPR-IBA45N-端C-端-NoNo-Amp/Neo2-1945-000酵母載體(ti) ：具有ADH2啟動子pKS1-STN-端-N-端NoNo-Amp/G4182-3801-000pKS2-STN-端-N-端YesNo-Amp/G4182-3802-000 每個(ge) 載體(ti) 的規格：5ｕg 產(chan) 品規格目錄號測序引物pASK-IBA載體(ti) ：上遊測序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-101pASK-IBA載體(ti) ：下遊測序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-102pASK-IBA載體(ti) ：上、下遊測序引物1nmol each, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-104pPR-IBA載體(ti) ：上遊測序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-111pPR-IBA載體(ti) ：下遊測序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-112pPR-IBA載體(ti) ：上、下遊測序引物1nmol each, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-114pEXPR-IBA載體(ti) ：上遊測序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-121pEXPR-IBA載體(ti) ：下遊測序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-122pEXPR-IBA載體(ti) ：上、下遊測序引物1nmol each, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-124 |
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