clemente associates TRIC Cell流程

clemente associates TRIC Cell流程

1、製備帶有結合抗HLA-G的納米顆粒。在操作前一天，用小鼠單克隆抗HLA-G抗體(ti) （BD）將磁性納米顆粒與(yu) 山羊抗小鼠IgG（clemente associates）偶聯。結合100μL無菌PBS、10μL抗體(ti) （0.5 mg/mL）和10μL納米粒。在4°C的冷藏室搖杆上攪拌過夜。第二天，通過首先添加900μL無菌PBS，然後磁化粒子10分鍾，去除所有液體(ti) ，去除未結合抗體(ti) 。

2、初始宮頸內(nei) 樣本到達ThinPrep溶液。400 x g的顆粒細胞持續5分鍾。將細胞顆粒重新放入12-13 mL無菌PBS中，最終體(ti) 積為(wei) 14 mL。

將樣品穿過插入15 mL離心管的250μm組織過濾器，以去除大塊粘液和細胞團。

3、通過離心和在14 mL無菌PBS中重新懸浮細胞，將宮頸樣品清洗2次。

最後一次清洗細胞後，將樣品重新懸浮在1.4 mL無菌PBS中。向樣品中添加100μL抗HLA-G塗層磁性納米顆粒（製備於(yu) #1）以分離滋養(yang) 層細胞。在4°C的冷藏室搖杆上培養(yang) 過夜。

隔夜孵育後，將滋養(yang) 層細胞在4℃的磁鐵（DynaMagSpin磁鐵；Life Technologies）上分離5分鍾。使用磁鐵，在4℃下用1 mL無菌PBS清洗滋養(yang) 層細胞3次（在移液前讓納米粒子磁化10分鍾）。最終移除未結合的細胞後，將捕獲的細胞在4℃下重新懸浮在100μL無菌PBS中。

6、取一小份分離的細胞懸液，計數分離的胎兒(er) 細胞，計算回收的胎兒(er) 細胞總數。使用血細胞儀(yi) 對第一次清洗的母細胞進行計數。

為(wei) 了檢查細胞的純度，用抗-hCG。

確定熒光燈數量hCG陽性細胞和總細胞（DAPI標記）。

派生%hCG陽性。